[生物——选修3：现代生物科技专题]

   细胞工程与基因工程在生产实践中具有广泛的应用，如图是抗除草剂番茄的培育过程。请回答下列问题：

（1）将抗除草剂基因连接到运载体上需要用________酶，在基因表达载体中除含有抗除草剂基因、标记基因外还必需有________共五部分构成，其中标记基因的作用是________。

（2）农杆菌转化是利用农杆菌中Ti质粒上的T—DNA，使外源基因进入并整合到番茄细胞的________上。

（3）获得抗除草剂基因的番茄细胞经过________过程发育成转基因番茄幼苗。其理论基础是________。

（4）在培养过程中，除添加必要的营养物质，还需要向培养基中添加________等物质，作用是________。

人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:

(1)htPA基因与载体用 切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用      技术。 

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射 ，使其     。采集的精子需要经过 才具备受精能力。 

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是     。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎，这体现了早期胚胎细胞的 。 

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 

下图为转基因抗病香蕉的培育过程流程图，其中质粒上的PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。请据图回答下列问题：

限制酶ApaⅠ      EcoRⅠ            PstⅠ        SmaⅠ识别序列和切割位点

  （1）在构建基因表达载体时，除了要在重组DNA中插入目的基因外，还需要有______________、_____________和_______________。

  （2）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做______________。

  （3）从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了____________________无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。

  （4）普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，经___________过程后得到________________，然后再转接到分化培养基上，诱导出试管苗，然后进一步培养成正常植株。获得的转基因植物经有性生殖获得的后代，是否也具有转基因特性？___________。

  （5）利用基因工程进行育种，可以培育出具有新性状的植株，这种育种方式的优点是

①                            ；②                              。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

转基因草莓中有能表达甲肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防甲肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）：

（1）这种新型疫苗，在免疫学中属于__________，图中①过程所形成的B叫做________________。

（2）该培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法是_____________，之所以把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，是利用了T-DNA_____________的特点。

（3）图中④过程叫做__________，将叶盘培养成草莓幼苗所利用的生物学原理是___________________。

（4）甲肝病毒表面抗原基因能否在草莓植株内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到了受体细胞的染色体DNA上，通常采用_____________的方法进行检测。

（5）甲肝病毒表面抗原基因在草莓细胞内表达的过程是__                           。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

下图表示中国科研人员对树鼩精原干细胞进行遗传修饰后，通过自然交配获得世界首只转基因树鼩的过程。请回答下列问题：

(1)培养精原干细胞时，定期更换培养液的目的是防止_______________对自身细胞代谢造成障碍，通入二氧化碳的作用是___________________________。

(2)图中涉及的基因工程的核心步骤是____________，通常采用________技术将GFP基因导入树鼩精原干细胞。

(3)利用PCR技术扩增GFP基因需要_______酶，外源的GFP基因能在树鼩体内表达的原因是______________。

(4)图示过程与通过体外受精培育转基因动物相比，避免了将受精卵移入______中继续培养的麻烦，同时也克服了胚胎发育到________时期进行胚胎移植的难题。

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

（1）甲、乙两种酶用同一种蛋白酶处理，酶活性与处理时间的关系如图1所示。甲酶的化学本质最可能是          。

（2）在实际生产中，固定化细胞技术实质上固定的是         。制备固定化酵母细胞时，常用的方法是下图2中[   ]         (填数字序号及名称)。

（3）在生活实践中，酶制剂在洗衣粉中被广泛应用。某研究性学习小组为探究某品牌洗衣粉中酶催化作用的最适温度，设计了如下装置进行实验，并将结果用曲线图A、B表示（如图3）。

①使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为                 。

②在0℃和75℃时，酶的催化效率基本都为零。但当温度再度恢复到45℃时，后者酶的催化能力已不能恢复，这是因为                                     。

（4）在现代生物工程中，可用酶在体外处理“蛋白质-DNA复合体”以获得包裹在蛋白质中的DNA片段信息，过程如图4所示。

①a、b过程中，酶作用的部位依次是                          。

②若将获得的DNA片段用PCR技术进行扩增，与细胞内的DNA复制过程相比，利用PCR技术扩增DNA时所需酶的不同之处是                          。

(1)绿茶是不经发酵制成的茶。在制作绿茶的工艺中．有一道工序是迅速将温度提高到70℃左右，目的是                                   ，从而保证茶叶鲜绿的颜色。

(2)红茶菌液是一种传统的活菌饮料，制作流程是制作红茶糖液一接种红茶菌种一发酵一红茶菌液。红茶菌种是酵母菌、醋酸菌和乳酸菌的共同体，可以用                    法分离纯化并计数。在接种活菌之前，红茶糖液要先煮沸后冷却，这是为了                                  。

(3)茶农在种植过程中喷施农药以预防害虫，但降低了茶叶的品质又污染了环境。为了解决这一难题，科学家用基因工程技术获得了具有抗虫基因的茶树体细胞，其间用到的工具是                。然后利用植物组织培养技术实现优良茶种的繁殖从而得到大量无病毒植株，其原理是        

       。在培养过程中，外植体要经过                 过程获得试管苗。

(4) 某研究小组完成对新鲜绿色茶叶进行叶绿体中色素的提取和分离实验时，由于各组操作不同，出现了以下两种不同的层析结果。出现如图结果最可能的原因是                       。实验室分离色素的方法为             法。茶叶中可能含α-淀粉酶，用               分离α-淀粉酶，α-淀粉酶相对分子质量较大，在色谱柱中移动速度      。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用             技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用      和        酶处理两个基因后，可得到     端与    端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图所示Ti质粒的T-DNA中，构建     并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含     的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再将其制备成用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用     法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达