[生物——选修1：生物技术实践]

石油是一种重要原料，但海洋石油开发中经常由于泄漏对海洋造成污染，自然环境中有一类叫作假单孢杆菌的细菌能够分解石油，图为分离和纯化假单孢杆菌的实验过程。

回答下列问题：

（1）图中②过程的目的是________，③过程培养出的是________。

（2）上述实验中，不需要进行灭菌处理的是________，培养基灭菌的常用方法为________。

（3）③→④的接种可选用________法，通过培养能获得________。此菌种细胞呼吸的类型是________。获得假单孢杆菌菌落后，在进行扩大培养时，应选用________培养基。

（4）与酵母菌相比，假单孢杆菌在细胞结构方面最大的区别是________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

我国是糖尿病多发国家之一，对糖尿病的治疗多采用注射人胰岛素的方法。大肠杆菌是名副其实的生产胰岛素的“活工厂”。回答下列问题：

（1）制备人胰岛素，首先要获取目的基因，用________法获取的胰岛素基因没有________。

（2）如图表示人胰岛素基因及重组质粒构建过程，用BamHⅠ对胰岛素基因和质粒切割，质粒的酶切片段用去磷酸化酶或加尾处理，都可以防止________。

（3）利用双酶切（如BamHⅠ和HindⅢ）除了可以防止上述现象的发生，还可以避免________。酶切不能使用的酶是________，原因是________。

（4）双酶切后筛选出目的基因，形成的重组质粒导入大肠杆菌时，要处理大肠杆菌，使之成为________。检测导入成功后培养大肠杆菌即可。

（1）发酵食品是指人们利用有益微生物加工制造的一类食品，具有独特的风味，如腐乳、泡菜、食醋、葡萄酒等。请回答相关问题：

1.参与腐乳制作的微生物主要是________。在卤汤中加入香辛料的作用是________和________。

2.泡菜制作过程中，盐与水的质量比为________；在测定泡菜中亚硝酸盐的含量时，为使泡菜汁透明，可加入________乳液；在加入________条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成________色染料，与标准液进行目测比较，就可估算泡菜中亚硝酸盐的含量。

3.在葡萄酒发酵过程中，若葡萄汁中含有醋酸菌，醋酸菌不能将葡萄糖发酵为醋酸的原因是________。

(2)用酵母菌生产人的乙型肝炎病毒（HBV）疫苗是第一个真核细胞基因工程的商业化产品。回答下列问题：

1.DNA重组技术的基本工具至少有三种，通常用加工处理过的动植物病毒或者质粒作为________，DNA连接酶可将HBV的遗传物质与目的基因连接起来，由此可以知道HBV是________（填“DNA”或“RNA”）病毒。

2.早期基因工程操作常用大肠杆菌作为受体细胞，首先用________处理细胞，使细胞处于________，从而容易吸收外界DNA分子。导入受体细胞后，目的基因的检测包括检测转基因生物染色体的DNA上是否插入目的基因、目的基因是否________和目的基因能否________。

3.用转基因动物生产药物时，转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产药物，因而称作________。科学家将基因表达载体用显微注射的方法注入受精卵中，受精卵在体外发育成胚胎后通过________技术，将其移入受体子宫内发育成转基因动物。

[生物——选修模块3：现代生物科技专题]

图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题。

（1）基因工程中最常用的载体是________，而作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有________。

（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是________。

（3）如图2，如果要利用PCR扩增出目的基因，应选择引物________。PCR过程中，除了要加入足量的引物外，还需要加入________酶，DNA链的延伸一般需要的温度为________。

（4）如果要目的基因导入大肠杆菌，一般要用Ca^2＋溶液处理细菌，使其达到________，有利于吸收外源DNA。为了筛选含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加________。

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；

科学家用农杆菌转化法培育出了转基因烟草。  

资料乙：T4溶菌酶在温度较高时容易失去活性。科学家用对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。

资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲的受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可以在不同个体的体内发育。回答下列问题：

（1）资料甲属于基因工程范畴，将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用的__________ 法。构建基因表达载体常用的工具酶是_____________ 和________________ 。在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是                   。

（2）资料乙中的技术属于_______ 工程的范畴，该工程是以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对__________________ 进行改造，或制造一种__________________ 的技术。 

（3）资料丙属于胚胎工程范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到          种的、生理状态相同的另一个雌性个体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为 ________体，兔乙称为___________ 体。

(1) 获取外源基因用到的工具酶是　　 ，为了提高实验成功率，通常利用            技术获得大量标记的外源基因。

(2) 外源基因能够整合到精子的           上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的            才能进入卵细胞中。

(3) 过程②采用的是             技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行          处理。

(4) 过程③需要在            (至少写出两点) 等条件下进行培养。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的              。

(5) 为了获得更多的早期胚胎，常用                  激素对供体进行处理，使其                   ，从而获得更多的卵母细胞。