科学家对鼠杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程。请据图回答：

（1）生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是    。

（2）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有    、   的特性。

（3）单克隆抗体制备过程运用了    和     等动物细胞工程技术手段。

（4）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有    。

（5）在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用    处理离体组织细胞使之分散开。

（6）改造鼠源杂交瘤抗体，生产鼠—人嵌合抗体，属于    (生物工程)的范畴。必须直接对    进行操作。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。回答下列问题：

(1)根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是      ，原因是      。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要      酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是     识别和结合的部位。

(2)研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是      。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是              

A（选修一生物技术实践专题）

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答下列问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。

（2）为选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈大小，分解圈大说明该菌株降解能力________。

（3）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。

（4）为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。为了排除________，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。

（5）在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和________。

B（选修三现代生物科技专题）

转基因水稻“金色大米”可以帮助人们补充每天必需的维生素A。由于含有可以生成维生素A的β－胡萝卜素，呈现金黄色泽，故称“金色大米”。培育流程如下，请据图回答：

备注：已知限制酶I识别序列和切点是；限制酶II的识别序列和切点是－CTAG↑－

（1）图中a、b所示获得目的基因的方法是________；能在短时间内得到大量目的基因的方法是________。培育“金色大米”基因工程操作四步中，核心步骤是________。

（2）据图分析，在构建c的过程中，目的基因用限制酶________（填I或II）进行了切割。

（3）将重组质粒c导入番茄细胞常用的方法是________，该方法的实施与番茄叶片受损后分泌的________化合物有关。检测转化成功的番茄植株，可采用________技术检测目的基因在番茄体内是否成功翻译。

（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含β－胡萝卜素量更高、效果更好，则需要通过_______工程手段对合成β－胡萝卜素的相关目的基因进行设计。

【生物—选修3：现代生物科技专题】

  科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了H5N1禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，下图为单克隆抗体制备过程示意图，图中A～G分别表示生物技术或细胞名称，请回答有关问题：

（1）若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的细胞，C过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导因素是＿＿＿＿＿＿。

（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成3种类型的D细胞，因此需用＿＿＿＿培养基筛选出＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的E细胞用于培养。

（3）在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是＿＿＿＿。随着细胞分裂次数的增多，就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的＿＿＿＿，需要用胰蛋白酶等处理使细胞从瓶壁上分离下来。

（4）如果将单克隆抗体基因导入奶牛受精卵，再通过早期胚胎培养和＿＿＿＿＿＿＿＿，可获得多头奶牛，从而从乳汁中提取更多的抗体；欲获得活性更强的抗体，可通过＿＿＿技术对基因进行修饰，以实现目的。

如图是从酵母菌细胞内获取某植物需要的某种酶基因的流程，请回答下列问题：

​

(1)图中cDNA文库含有酵母菌的________基因，与基因组文库中的基因相比无________、_________。

(2)①过程提取的DNA需要用限制酶，该酶能够识别_____________________，并且使_____________________断开。

(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用PCR方法扩增，该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 )、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、________和________。

(4)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从________出发，通过设计蛋白质结构和推测相应的氨基酸序列，进而确定相对应的________，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶___________，对含病毒基因的DNA和质粒，进行切割。A中能使抗病毒基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列是___________，其中培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有___________，作为标记基因。

（2） 目的基因能在香蕉细胞中稳定遗传的关键是___________；香蕉组织块经过①②获得转基因抗病植株，其依据的原理是___________。

（3） 香蕉具有不耐储存的特点，科学家把控制香蕉成熟的基因导入香蕉，获得转基因延熟香蕉，储存时间可以延长两周。在延熟过程中，R蛋白起着很关键的作用。如果用蛋白质工程来生产R蛋白，应从预期的蛋白质的功能出发来设计___________，再推测应有的氨基酸序列。

（4）科学家把得到的抗病香蕉和耐储存的香蕉做成了人工种子，人工种子就是以植物组织培养得到的___________等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子，在适宜条件下同样能够萌发长成幼苗。

（1） 从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的                进行改造。

（2） 以甲基因序列为基础，获得乙基因的途径有          甲基因或         乙基因。

（3） 蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过              和                ，进而确定相对应的            ，据此获得基因，在经表达、纯化获得蛋白质后，还需要对蛋白质的        进行鉴定。

生物技术已经渗入到了我们生活的方方面面，比如：

（1）目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素B链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对______________（胰岛素/胰岛素mRNA/胰岛素基因）进行定向改造。将改造后的分子导入受体大肠杆菌，一般需要用________处理大肠杆菌细胞，使之成为____________细胞。

（2）科学家利用人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，制作出了早早孕试纸。要获得人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，需要先将____________________注射到小鼠体内，培养一段时间之后，将从小鼠的脾脏中提取出的____________和小鼠的骨髓瘤细胞融合，获得杂交细胞。

（3）许多不孕不育的夫妇受益于试管婴儿技术，在体外受精前，要对采集到的精子进行____________处理，才能与卵子受精。受精后形成的受精卵要移入_____________中继续培养一段时间再移植到母亲体内，早期胚胎发育到___________阶段的某一时刻，会冲破透明带，称为“孵化”。

（4）在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧柴以及收入等问题，其主要体现了生态工程的基本原理是__________________（填一个即可）。

（1）理论上，基因组文库含有生物的         基因；而cDNA文库中含有生物的            基因。

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中          出所需的耐旱基因，导入植物体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的              ，如果检测结果呈阳性，再田间试验中检测植株的              是否得到提高。

（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了             （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。

（4）蛋白质工程的基本程序是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的         序列→找到相对应的          序列

(1)在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞采用最多的方法是________，筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的________的表达。

(2)为促使图中②、③过程的顺利完成，需要在________条件下进行。要快速繁殖转基因抗软化番茄植株，目前常用的科技方法是________。为获得这种番茄的脱毒苗，应用其________进行培养。

(3)除了图示培育方法外，还可通过蛋白质工程技术，对________的结构进行特定的改变，从而获得抗软化的番茄品种，关键的操作是对________进行定向改造。

(4)为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其他植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的_____         _  (结构)中。