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            • 1. 野生猕猴桃是一种多年生的富含VC的二倍体(2N=58)小野果。下图是某科研小组以野生猕猴桃种子(aa)为实验材料培育抗虫猕猴桃无子新品种的过程,据图回答:


              (1)各代号表示的育种类型中:①表示________,③表示________。

              (2)③⑦过程用到的药剂是________,原理是______________________________。

              (3)若⑤过程是杂交,产生的AAA植株,其体细胞含染色体数目是________,该植株所结果实无子的原因是____________________。

              (4)⑥过程中用到的工具酶是____________________________。AAA的细胞成功接受抗虫基因B后,经植物组织培养产生幼苗,移栽后长成AAAB的抗虫新品种植株,这种变异属于________。

            • 2.

              科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图,请回答相关问题:


              (1)过程①获得重组胚胎之前需要通过__________________技术获得重组细胞,接受细胞核的去核卵母细胞应该处于___________________时期。

              (2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其_______________分离出ES细胞。步骤③中,需要构建含有干扰素基因的__________________。

              (3)将基因导入ES细胞常用的方法是________________________。体外诱导ES细胞向不同方向分化是利用了ES细胞的_________________。

              (4)为检测干扰素基因的表达情况,可采用__________________方法,若有杂交带出现,表明目的基因已成功表达。

            • 3.

              下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素(由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素)的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个,且三种酶切割形成的黏性末端各不相同,而Ampr表示青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题:

              (1)过程①所用细胞是________________,过程②所用的酶分别是___________________。

              (2)人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增,扩增时应在PCR扩增仪中加入_______________________酶用以催化互补链的合成。

              (3)过程④所用的酶是___________________________。

              (4)若用限制酶PstⅠ切割,完成过程④、⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上,再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上,待形成12个菌落后,将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后,菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含_____________质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取,选取的依据是_____________________。

            • 4.

              科学家将人的生长激素基因与质粒重组后,导入牛的受精卵,并成功从牛奶中提取到了人生长激素,操作流程如下图所示,请据图回答。(已知限制酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-,限制酶II的识别序列和切点是-↓GATC-)。

                     (1)获取目的基因的主要途径包括从已有物种细胞中提取和_____________。

                     (2)据图分析,在构建重组质粒的过程中,目的基因用________________(填“限制酶I”或“限制酶Ⅱ”)进行了切割。

                     (3)获能的精子和卵细胞相遇后首先发生____________反应,之后精子接触卵黄膜,并进一步与卵结合,在该过程中,_______________和____________________可以防止其它精子入卵。

                     (4)图中“受体”是__________________________;“符合要求的个体”是指_____________________________。

                     (5)将牛受精卵进行人工培养后,一般可选择__________________期的、发育良好的胚胎进行移植。

            • 5.

              豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因(manA)猪,主要流程如下图,图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子,neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题:

              (1)该培养过程涉及多种现代生物工程技术,属于分子水平的是___________,其原理是______________________。

              (2)PCR过程中,除了要加DNA模板以外,还需加________ 和________,以及所需的酶是_________。温度降低到55℃的目的是__________。

              (3)PSP是______________识别和结合的部位,步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

              (4)若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用___________法以获得大量的卵细胞。

              (5)进行早期胚胎培养时,通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养,其中CO2的主要作用是____________________;另外,需定期更换培养液,目的是___________________。

              (6)步骤⑥中,通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

              (7)与饲养普通猪相比,饲养转基因猪的优势是____________________________。

            • 6.

              如图是科学工作者利用苏云金杆菌体内的抗虫基因培育转基因抗虫水稻的培育过程。请据图回答下列问题



               

               

              (1)实验中如果用EcoR Ⅰ切割多个外源DNA片段和质粒,则酶切产物用_______进行连接后,两两连接所形成的产物有________种,实验中最好选择_______________切割外源DNA片段和质粒。请指出质粒上至少要有一个标记基因的理由:_____________________  。

              (2)利用PCR技术可获取目的基因,据图回答下列问题:



              ①PCR技术的原理是_____________,利用PCR技术获取目的基因的前提是_____________。

              ②由图中信息分析可知,催化C过程的酶是_______,它与正常细胞里的酶的区别是_________。

              (3)转基因抗虫水稻的目的基因是否完成表达,从分子水平上的检测方法是__________________。      


              (4)科学家发现该抗虫毒蛋白的杀虫效果不佳,然后通过____________或基因合成,对现有抗虫毒蛋白进行改造,这项技术属于_______________工程。

            • 7.

              如图是科学工作者利用苏云金杆菌体内的抗虫基因培育转基因抗虫水稻的培育过程。请据图回答下列问题:


              (1)实验中如果用EcoR Ⅰ切割多个外源DNA片段和质粒,则酶切产物用DNA连接酶进行连接后,两两连接所形成的产物有    种,实验中最好选择               切割外源DNA片段和质粒。

              (2)图示中属于脱分化阶段的是            (填序号),该过程需要在培养基中添加营养物质和                等成分。

              (3)转基因抗虫水稻的目的基因是否完成表达,从分子水平上的检测方法是          ,从个体水平上的检测方法是                             。      

              (4)科学家发现该抗虫毒蛋白的杀虫效果不佳,然后通过            或基因合成,对现有抗虫毒蛋白进行改造,这项技术属于               工程。

            • 8.

              回答下列基因工程的有关问题。

              (1)步骤①和②中常用的工具酶是                              

              (2)上图中质粒上有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因两个标记基因,经过①和②步骤后,有些质粒上的                 基因内插入了外源目的基因,形成重组质粒,由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。

              (3)步骤④:将锥形瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养,能在C中生长的大肠杆菌有                种。

              (4)步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落,分别接种到D(含氨苄青霉素和四环素)和E(含四环素)两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于            (填D或E)上,请在图中相应的位置上圈出来(标在答题纸相应位置)。

            • 9. 绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因,可以合成一种抗TMV蛋白,叶片对TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物,由于TMV的感染会导致大幅度减产,研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草,主要流程如图所示。

              (1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA,然后合成目的基因。图中过程①表示________________。

              (2)过程③构建重组Ti质粒时,必须使用____________和________________两种工具酶。

              (3)由图分析,在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为____________,重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是________________________。

              (4)在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外,还必须添加________________________,以保证受体细胞能培养成再生植株。

              (5)过程⑥可采取____________________的方法,检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中,可通过____________________的方法来确定植株是否具有抗性。
            • 10.

              如图是从酵母菌中获取某植物需要的某种酶的基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题:

              (1)图中cDNA文库      基因组文库(选填“大于”或“等于”或“小于”)。

              (2)①过程提取的DNA需要         的切割。

              (3)为在短时间内大量获得目的基因,可用的技术是       ,其原理是                。该反应体系的主要成分应该包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水,4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。

              (4)目的基因获取之后,需要进行基因表达载体的构建,基因表达载体的组成必须有______         及标记基因等,此步骤是基因工程的核心。

              (5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是         ,检测目的基因是否导入受体细胞、是否翻译出相关的蛋白质时所用的方法分别是_________________、_________________技术进行检测。

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