回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

[生物——选修1：生物技术实践]

现有紫色不甜玉米（基因型为AABB）和白色甜玉米（基因型为aabb）两个品种，两对基因自由组合，如果要尽快培育出紫色甜玉米，可用单倍体育种的方法，请回答有关问题：

（1）可将两个品种的玉米进行杂交得到F₁，用F₁的花药进行离体培养，可得到________倍体花粉幼苗，这些花粉幼苗的基因型包括________，再经过人工诱导，即可获得所需的品种。与杂交育种相比该育种技术的最大优点是________。

（2）通过花药培养产生花粉植株一般有两种途径，一种是花粉通过________发育为植株，另一种是花粉在诱导培养基上形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株，愈伤组织的特点是________。

（3）在花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。一般来说，在________期，花药培养成功率高。为确定花粉发育时期，常用________法染色，若花粉细胞核不易着色，需采用________法染色。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

A．[生物技术实践]

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

(1)将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有___________________。

(2)稀释涂布平板法可用于微生物的接种和计数，该实验小组将样液分别稀释了10倍、10²倍、10³倍、10⁴倍，然后将10²倍、10³倍、10⁴倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，涂布多个稀释倍数的稀释液的目的是____________________________________。若有三个平板均涂布了稀释倍数为10³倍的稀释液1mL，分别形成了68、70和72个菌落，则原样液体中每毫升含有淀粉分解菌________个，该方法测量值一般比实际值________。

(3)涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入________，挑取有明显淀粉分解圈的单菌落，一般来说，淀粉分解圈越大，则淀粉分解菌分解淀粉的能力越________。

B．[现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

​

(1)若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

(2)上述两种途径获得的抗冻基因________(填“是”或“否”)一定相同，原因是_____________________________________________。

(3)用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(4)图中过程⑤表示______________________________________。

下表是4组生物学实验培养基。请回答下列问题

（1）进行动物细胞培养应选用培养基      （填组别）。在进行细胞培养时，首先，将动物体内的一部分组织取出，经过机械消化或         消化，使其分散成单个的细胞。如果是培养胚胎干细胞，则首先需要在培养皿底部制备一层胚胎成纤维细胞，称为        ，这层细胞具有                    点胚胎干细胞是一种未分化细胞，具有         性和           核型。

（2）分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基b。在含有       酶的细菌菌落周围会出现               ，这是由于尿素被分解产生的         使PH升高，酚红指示剂产生颜色变化。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力          。该实验用的分离方法是             。

（3）用培养基a进行植物组织培养，则培养基还需要加入               。

（4）下表对应关系中，错误的是             

我国四川省宜宾市的柑橘种植由于受到柑橘大实蝇的危害，橘农遭受到了很大的损失，当地政府想尽一切办法帮助橘农尽量减少损失。

（1）有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是_______法，新鲜的柑橘皮中含有大量的果蜡、果胶和水分，如直接压榨，出油率较低。为了提高出油率，需将柑橘皮干燥去水，并用        浸泡，浸泡时间为10h以上 。

（2）某橘农发现自家有一株橘树具有抗虫性状，欲利用花药离体培养技术大量繁殖，则应选择花粉发育至         单核期的花药培养成功率最高。该方法利用了植物细胞的________。选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，最常用的方法有__________法，某些植物的花粉不易着色，需采用_____________法。

阅读下列资料，回答相关问题：

资料1：1958年，美国科学家将胡萝卜韧皮部的细胞放在培养基中培养，得到了完整植株，并能开花结果。

资料2：葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸为目标氨基酸后，用有效方法以脯氨酸替代甘氨酸，结果其最适反应温度提高了10～12 ℃，使蛋白质空间结构更具刚性。

资料3：“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。

（1）资料1中所运用的技术手段是　　　　　。（1分）由离体的细胞获得完整植株，需经过　　　　　　　　　　　　过程。这项技术可以高效快速地实现种苗的大量繁殖，因此叫做植物的　　　　　　　技术。

（2）资料2属于　　　　　　　（1分）工程的范畴。该工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种　　　　　　　的技术。在该实例中，引起葡萄糖异构酶空间结构改变的根本原因是　　　　　　　发生了改变。

（3）资料3中的“试管婴儿”，并不是真正在试管中长大的婴儿，它可以理解成由实验室的试管模拟人体　　　　　　　　（1分）功能。它实际上结合了体外受精、　　　　　　　　和　　　　　　　　等多种技术手段。

下表是4组生物学实验培养基。请回答下列问题

（1）进行动物细胞培养应选用培养基            （填组别）。在进行细胞培养时，首先，将动物体内的一部分组织取出，经过机械消化或            消化，使其分散成单个的细胞。如果是培养胚胎干细胞，则首先需要在培养皿底部制备一层胚胎成纤维细胞，称为           ，这层细胞具有             特点。胚胎干细胞是一种未分化细胞，具有                性和                 核型。

（2）分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基b。在含有              酶的细菌菌落周围会出现                 ，这是由于尿素被分解产生的                使PH升高，酚红指示剂产生颜色变化。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力               。该实验用的分离方法是                     。

（3）用培养基a进行植物组织培养，则培养基还需要加入                    。

A.A        B.B                  C.C               D.D