Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的________发育而来，所采用的技术应为________，培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、________等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的________细胞，ES在形态上表现为________。

（3）由于物种间存在________，因此自然情况下哺乳动物远亲物种问的配子往往无法完成________作用，或者即便能完成也不能发育，但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠一大鼠、人—鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞中通常含有________个染色体组。

    图3

（1）微载体的直径很小，其培养原理是将对细胞无害的颗粒——微载体加入到培养液中，使细胞在其表面____生长，而且操作中需要通过搅动使微载体始终保持悬浮状态，从而让细胞与培养液充分接触，这样细胞就可以在载体表面繁殖成 ______（“单层”、“多层”）细胞。

（2）培养罐中培养细胞时，要注意保持适宜的温度和pH，还需要提供细胞所需的营养、气体环境等，为维持培养液的pH，应在培养液中加入95%空气和___的混合气体。图3是某科研小组培养的细胞，由于培养用具灭菌不严格，结果出现曲线2的情况，为了避免这种情况通常可以在培养液中加入抗生素，其作用是______。

（3）在生产单克隆抗体的过程中，杂交瘤细胞在加入培养罐前，需筛选出符合条件的细胞群，还要对选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和_________方能加入培养罐培养。单克隆抗体作为诊断试剂，具有________________的优点。

（4）科研人员利用明胶微载体培养出了胚胎干细胞，并在培养液中加入______因子，成功构建了骨组织。

（5）在试管动物的培育中，涉及的关键技术是体外受精和___________的培养，再将这些胚胎进行移植，就可以实现良种动物的大量繁殖。移植中要求受体母牛要具有健康的体质和____________的能力。

（1）胚胎干细胞可由囊胚的_______细胞分离培养获得。

（2）利用PCR技术扩增干扰素基因时，需在______________酶的作用下进行。PCR技术主要利用了______________的原理。

（3）将经过修饰的腺病毒与干扰素基因重组形成的______________转移到ES细胞中，筛选出成功转移的细胞进行扩增培养。

（4）有人得到如图所示的含有目的基因的表达载体，但其不能在宿主细胞中表达目的基因产物，分析目的基因不能表达的原因是______________。

（5）由于干扰素很难在体外保存，为解决这一问题，可利用______________对干扰素进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→ 设计预期蛋白质的结构→ 推测应有的__________→ 找到对应的脱氧核苷酸序列。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）由图1可知，步骤②中要分离出ES细胞，需将重组胚胎培养到_______期。将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞，是因为ES细胞在功能上具有______________。

（2）步骤③中，需要利用PCR技术扩增目的基因。利用PCR技术扩增基因的前提是要有________序列，以便根据这一序列合成_______。图2 A,B,C,D四种单链DNA片应选取_______作为引物（DNA复制方向总是从5’向3’延伸）。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为_________。

（3）基因工程的核心是_________，其目的是使目的基因在受体细胞中___________，并且可 以___________，同时使目的基因能够________。检测目的基因是否转录的方法是________。将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发_____色荧光的细胞进行体外诱导。

下图表示利用小鼠胚胎干细胞（ES细胞）做的研究，请分析回答下列问题：

（1）a过程表示基因工程，则其核心步骤是______________________________________。

（2）ES细胞在饲养层细胞上，能够维持__________状态，为检测致癌基因是否已捕入ES细胞的DNA，可采用__________________技术。

（3）c过程的胚胎培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加____________________________以及血清等物质。

（4）d过程移入的胚胎能够存活，是因为受体子宫并不会对其发生____________，同时能够与受体子宫建立正常的________________联系。对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的__________________细胞进行鉴定。

（5）用肝癌细胞作抗原刺激B淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后经筛选、细胞培养，获得抗癌细胞的单克隆抗体。该产物与____________________相结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。

胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题。

（1）应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于________，细胞B的名称是________。

（2）应用2中牛完成体内受精的场所是________，刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为________。这种试管牛的产生，采用的胚胎工程技术有________（至少答出2种）等。

（3）应用3中细胞C、D分别取自________、________。

（4）应用4中通过________技术获得二分胚①和②，同时，可以通过取样________进行分子水平的早期胚胎性别鉴定；也可以在细胞水平上通过________对的分析进行性别鉴定。

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

(1)图中进行的是________(填“体内”或“体外”)基因治疗，该过程利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和________等。

(2)ES细胞是由早期胚胎或________中分离出来的一类细胞，利用其具有________ 性，可以将其培养成人体各种组织器官。

(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的________，该结构除了复制原点外，至少包含____________________和干扰素基因等，为检测干扰素基因是否表达，可以采用____________________的方法。

(4)为了快速获得更多的目的基因常常采用________技术进行扩增。

下图为牛胚胎移植的基本程序，请据图回答：

（1）图中a、b、c过程分别是指 ______    ______、___________  _____、____ _    _____。

（2）在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行              处理,这样处理的原因是供体和受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎移入受体提供了相同的生理环境，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

（3）为了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是________          __；

处理的时期是_____        ___和________

（4）从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有_______________                     _______。

Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：