干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

（1）上图中进行的是_________（填“体内”或“体外”）基因治疗，该过程中利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和_____________等。

（2）ES细胞是由早期胚胎或_____________中分离出来的一类细胞,具有_____________性，可以将其培养成人体各种组织器官。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的_________________，该结构除了复制原点外，至少包含__________、____________、____     _和干扰素基因等；为检测干扰素基因是否表达，可以采用_____________________的方法。

⑴对猪基因组进行改造，可以选择某种有调控作用的目的基因，重组后导入受体细胞，以达到抑制猪抗原决定基因             的目的。进行 DNA重组时需要使用的工具酶是                                               。

⑵选择猪胚胎干细胞作为受体细胞，胚胎干细胞是由              或            中分离出来的一类细胞。将目的基因导入后，利用标记基因的作用               含有目的基因的受体细胞。

⑶将含目的基因的胚胎干细胞注入猪的囊胚，而后将囊胚通过                          技术移入受体子宫，获得转基因猪。

⑷采用核移植技术克隆转基因猪时，应选用处于                期的卵母细胞作为受体细胞；随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞，经诱导分化形成多种器官，这是利用了胚胎干细胞的                                。

    （1）ES细胞来自于__________，ES细胞在功能上具有____________，当培养在__________上时，细胞只分裂不分化。

    （2）将绿色荧光蛋白基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成脂质体中，利用脂质体将融合基因表达载体转染到ES中，此过程中绿色荧光蛋白基因表达载体进入ES细胞的方式是为_______。在ES细胞的培养过程中，环境中必须保持一定浓度的CO₂，其目的是__________________。

    （3）为检验ES细胞的染色体上是否含有绿色荧光蛋白基因，在分子水平上可以采用________________方法检测；在细胞水平上，可用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可以确定，细胞内有______现象的ES细胞转染了绿色荧光蛋白基因。筛选出转染了绿色荧光蛋白基因的ES细胞，用显微注射法注入到囊胚内的_______部位，将来发育成具有荧光嵌合现象的小鼠。

    （4）图X代表的操作是_____________；甲在乙体内存活的生理学基础是_____________。

28.   (10分)荷斯坦牛以产奶量高而闻名于世，如果利用生物工程技术培育优良荷斯坦牛。请回答：

(1)利用　　　　　　　　激素处理适龄奶牛，使其　　　　　　　　　，采集的卵母细胞培育到减数第二次分裂中期，在显微镜下可以观察到次级卵母细胞和　　　　　　　　。

(2)在体外受精前一般要对精子进行处理，目的是使其　　　　　　　。

(3)为了得到同卵多胎，在胚胎发育到　　　　　　时，进行胚胎分割，在这个过程中，要将　　　　　　　　　　　均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和发育。

 (4)在奶牛出生前要确定荷斯坦牛的性别，可以利用少量胚胎细胞进行性别鉴定，该技术采用的方法是　　　　　　　　。

(5)荷斯坦牛的胚胎干细胞可从　　　　　　　　中分离获取。

人的血清白蛋白有着广泛的药用价值，科学家通过培育乳腺生物反应器生产人血清白蛋白，流程如下：

​

（1）在基因工程中，①被称为　　　　　　　。若①因数量少而不能满足生产需要，常利用　　　　　技术进行扩增。

（2）②应该取自　　　　　(填“雄性”或“雌性”)荷斯坦奶牛，由②到③的过程中，需将②用　　　　处理后进行培养。

（3）从③到④的过程中，用于核移植的供体细胞③一般都选用传代10代以内的细胞，原因是　　　　　　　　　　　　；作为受体细胞的卵母细胞需培养至

　　　　　期；形成④时常通过　　　　　(物理方法)进行激活，使其完成分裂和发育进程。

(4)④培养至⑤后，可通过　　　　　技术获得多个⑥，从而提高胚胎的利用率。胚胎移植的实质是　　　　　　　　　　　　　　　　。

我国研究人员创造出一种新型干细胞——异种杂合二倍体胚胎干细胞，具体研究过程如下图所示，请据图回答问题：

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的      发育而来，所采用的技术应为     技术，培养过程中使用的培养液处含有一些无机盐和有机盐外，还需添加微生素、激素、     等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的       细胞，ES在形态上表现为           。

（3）由于物种间存在     ，因此自然情况下哺乳动物远亲物种间的配子往往无法完成    作用，或者即便能完成也不能发育。但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠-大鼠、人-鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞通常含有       个染色体组。

 (1)从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为         ，在细胞培养液中加入鼠血清的目的是        ，培养液中还需加入一定量的抗生素的目的是           。

(2)图中2-细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为         ，也可从灰鼠体内取出卵子，通过            后进行早期胚胎培养获得。

(3)图中重组囊胚通过胚胎移植技术移入白鼠子宫内继续发育，在移植前需要对代孕母鼠进行         处理，使其生殖器官(子宫)适于早期胚胎的植入和正常发育。

(4)小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的             分离培养获得，这类细胞在形态上表现为             ，功能上具有发育的全能性。

（1）利用改造的iPS细胞培育出活体老鼠，从而证明iPS细胞和胚胎干细胞一样具有发育的          。

（2）图中病毒的作用是                        。①是                  过程，早期胚胎经过②                  植入母体子宫内发育成胎儿。

（3）iPS细胞经体外诱导分化，可以培育出人造组织器官，这样培育的特殊细胞或器官移回病人体内与异体器官移植相比，最大的优点是_                           __。

（4）山中伸弥是一个比较严谨的科学家，他充分认识到了iPS细胞目前的研究状态，曾说“制造iPS细胞就像制造癌细胞”， 制造iPS细胞所使用的材料中，致癌可能性最大的是       。后来Scripps研究所的丁胜实验室用功能性的蛋白质取代过表达的四个转录因子，也取得了成功。使用蛋白质诱导的iPS细胞癌变的可能较低的原因是              。

（5）日本京都大学研究团队宣布，继去年成功从老鼠的iPS细胞中制造出具有生殖功能的精子后，又成功从老鼠的iPS细胞中培育出卵子，并使其体外受精后产下健康后代。若精子和卵子都来自雌鼠的iPS细胞，则它们受精后发育的后代的性别是              。

（1）过程x若想顺利进行必须满足两个条件：①来自父方的精子要进行________。②来自母方的卵子要培养至________。

（2）这两个孩子性别是否相同？________（填“是”或“否”）。若借助人工手段获得这样两个胎儿，需要用到的技术手段是________，操作过程中需要将囊胚的________均分。

（3）________（生物技术）是甲、乙产生的最后一道工序。一般来说，该技术操作比较合适的时期是________。

（4）该夫妇计划为孩子保留部分胚胎干细胞（ES细胞）。ES细胞是由________中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上的特点是________。

(1)如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基本步骤是：从A品种牛体内取出体细胞，进行体外培养，然后再从培养细胞中取出____________注入B品种牛的______________卵母细胞，经过某种刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为____________，将该胚胎移入代孕母牛的__________中，通过培育可达到目的。

(2)上述过程中运用了动物细胞工程的哪些技术？

____________________________________________________。

(3)克隆牛的产生说明____________具有全能性。由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自________个亲本，细胞质来自_________（雌／雄）性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成__________(相同／不同)。

(4)核移植技术的应用前景非常广阔。在畜牧生产中，可以用于繁育_____________；在保护_______________方面，可望利用这项技术增加存活数量；在医药卫生方面，人的核移植胚胎干细胞经过____________，形成相应的组织、器官后，可以用于组织器官的_____________。