苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：

(1)②中培养目的菌株的培养基中应加入_____作为碳源，从功能上讲，该培养基属于

_________培养基。②中不同浓度碳源的培养基________ (填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用______________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于____________________________________________________；使用______________________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是__________________________________________________________。

(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？

_______________________________________________________（至少填两种方法）。

选修1：生物技术实践]

 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。                           

回答下列问题：

（1） 为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2） 取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3） 为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______（填“敏感”或“不敏感”）；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____（填“敏感”或“不敏感”）；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。

(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。

下列操作中不是获得较纯菌种的措施的是（ ）

一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

     （1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³稀释度．各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为 ___________ ．

     （2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的配置特点是 ____________________________．

       （3）接种技术的核心是 ____________________________________．

       （4）在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是 ________ ，有透明圈菌落利用的氮源主要是 __________ ，据此可筛选出目的菌．实验结果如图显示的A～E五种菌株中， ______ 是最理想菌株．

回答下列有关微生物培养的相关问题：

Ⅰ．已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可以用于生物柴油的生产。回答下列问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用____________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可用____________（填"萃取法"或"水蒸气蒸馏法"）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以_______为碳源的______（物理状态）培养基进行培养。培养的结果发现没有得到微生物B的菌落或者数量极少，可在此操作之前增加____________这一操作步骤。

（3）若要测定微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数，若要测定活菌数量，可选用____________法进行计数。

Ⅱ．某医院有一个罕见的细菌感染患者，医生想通过抑菌实验，从常用的抗生素一青霉素（A），氨苄青霉素（B），庆大霉素（C），氯霉素（D），环丙沙星（E）中寻找对病人最有效的一种．部分实验步骤如下：

第一步：按下方所列配方配置培养基：

第二步：取单菌落适当稀释，用3支无菌滴管吸取从此病人体内分离到的细菌悬浮液2滴，滴于3个平板培养基表面，然后分别用3个无菌涂布棒涂匀，37℃恒温箱中培养，使细菌长满平板表面。

（4）上述培养基配方中作为蛋白胨为微生物的生长提供了____________________。

（5）如图圆环表示一个培养皿平面，用浸有不同抗生素的圆纸片间隔放到培养基土，如下图所示。

培养2d后，A滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对青霉素____________；B滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对氨苄青霉素____________；C滤纸片周围的透明圈比A滤纸片周围的透明圈小，说明____________；D滤纸片周围的透明圈比A滤纸片的也小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是氯霉素的____________。

（6）经测量透明圈大小，得到如下结果（单位mm）：

那么，你建议医生使用哪一种抗生素？____________．

漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。如图所示是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（ ）

某同学配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后,对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌,当培养基温度下降到50℃时,在酒精灯火焰附近倒平板,待培养基冷却至室温,按下表处理。将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2~3天,观察每个培养皿中的菌落特征和数目。回答下列问题:

(1)配制乳酸杆菌的培养基时，除了几种主要的营养物质外，还需要在培养基中添加________________。

(4)为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是________________________________。