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            • 1. 固定化的高温淀粉酶被大规模用于工业生产。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌,其筛选和固定过程如图1所示。菌株在含有淀粉的固体培养基上可释放淀粉酶分解淀粉,在菌落周围形成透明圈。请分析回答:

              (1)与大肠杆菌相比,嗜热菌DNA碱基组成的特点是                          

              (2)Ⅰ号、Ⅱ号培养基的配制主要包括如下步骤:a.溶化,b.调pH,c.灭菌,d.称量。正确的操作步骤顺序是                 。溶化过程中当琼脂完全熔化后,还需用蒸馏水                 

              (3)将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅内,加盖并将排气管插入内层灭菌桶内的排气槽内。拧紧固定盖子的螺栓时,应注意                ,以免漏气。

              (4)1号培养基中以淀粉为唯一碳源,从功能上讲该培养基属于                 。待菌落长出后,应选择                 的菌落接种到Ⅱ号培养基,第二次及以后的划线,总是从                 开始,实验中过程③的目的是                 

              (5)若要保证高温淀粉酶的活性在固定化处理时不受损失,且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性,则最好选择图2中的                 固定化工艺(填图中字母)。

            • 2. 下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法,请回答相关问题:

              (1)图甲是利用__________法进行微生物接种,图乙是利用________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是______和_________;对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。

              (2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行?___________________。

              (3)接种后,在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养?__________________。

              (4)下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解,其接种方法是____(填“图甲”或“图乙”)。

            • 3.

              为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”,某同学进行了如下实验:

              请分析回答下列问题:

              (1)配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外,还应加如适量的________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间,要进行的操作是________。

              (2)接种微生物的方法有很多,图1中过程③所示的方法为________。用该方法统计样本菌落数时,同时需要做A、B、C三个培养皿,原因是________。用该方法统计样本菌落数后,

              所得数据需要乘以10n后,才可表示乳酸菌的数量(单位:个/ml),这里的n=________。

              (3)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤:

              步骤1:分别取________加入三组无菌培养皿中,再加入灭菌并冷却到________℃左右的培养基,立即混匀,静置凝固成平板。

              步骤2:向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

              步骤3:将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间,观察比较培养基中菌落生长情况。

            • 4.

              如下图为微生物的实验培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤。请回答下列问题:


               

               

              (1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有无机盐、水、________四类。①是制备培养基时________中的主要操作,该操作需使锥形瓶的瓶口通过火焰,目的是通过灼烧灭菌防止瓶口的微生物污染培养基,实验操作中的灭菌方法还有_________。

              (2)该纯化醋酸菌的接种方法是______________;完成步骤④的操作,接种共需要________次灼烧处理。如果需要统计醋酸菌液中活菌的数目可以采用______________法进行接种;培养过程中,常选择菌落数在__________的平板统计计数。

              (3)食草动物能够消化食物的关键是体内存在能合成__________酶的微生物能够降解纤维素,该酶是一种复合酶,它至少包括__________________。为检测纤维素分解菌的存在与否,还应加入__________染料,形成________色复合物,若产生__________,则证明有纤维素分解菌存在。

            • 5. 紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用。研究人员从红豆杉中发现了一种具有产紫杉醇能力的内生真菌。为探究制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜pH和温度,进行了如下实验:
              ①培养菌株,离心收集菌丝体,并用渗透压稳定剂洗涤两次;
              ②将获得的菌丝体,分别置于不同pH或温度的培养液中,并加入适量酶液,震荡、摇匀后,每隔一段时间,取样、过滤、离心,用渗透压稳定剂洗涤两次后,收集纯化的原生质体。

              ③统计原生质体数量,结果如下。


              分析回答:

              (1)步骤②中,加酶液的目的是_______________________,洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是______________________________________。

              (2)结果表明,制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是__________、________、_______。

              (3)检验原生质体再生能力,需要配制再生固体培养基,培养基灭菌常采用___________ 法,灭菌后需要冷却到_______℃左右才能用来倒平板。

              (4)实验中将收集到的原生质体浓度为30×106个/mL培养液先稀释104倍,再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养。一段时间后,统计得到的菌落数分别为:27、21、24。则原生质体再生率(能再生的原生质体数占全体部原生质体的比例)约为________________。

            • 6. 大肠杆菌有许多菌株,野生型菌株在普通培养基中就能成活,菌株A: met-bio-thr+leu+thi+需要在基本培养基中补充甲硫氨酸、生物素,菌株B:met+bio+thr-leu-thi-需要在基本培养基中补充苏氨酸、亮氨酸和硫铵。科学家Lederberg和Tatum曾做了如下实验。回答下列问题:

              (1) 如上图所示,菌株A和B混合培养几小时后,把大肠杆菌洗涤后涂布在基本培养基的固体平板上,发现长出了若干野生型菌落,对此实验现象可作出如下假设:

              ① 不同大肠杆菌间遗传物质发生重组。

              ② ____________。 


              (2) 为了探究上述假设①,有人设计了一种U型管(如图),中间用过滤器隔开,大肠杆菌不能通过,但培养液和营养物质可通过,实验如下。请补充相关实验内容:


              实验步骤:

              ① 在U型管中加入________; 

              ② U型管两端各加入菌株A、菌株B,培养几小时;

              ③ 将U型管两端的大肠杆菌各自取出洗涤后涂布在____上,观察有无菌落。 

              实验结果:________。 

              实验结论:菌株A与菌株B之间遗传物质发生重组。

              (3) 现有1 L水样,用无菌吸管吸取1 mL转至盛有9 mL无菌水的试管中,依次稀释至103倍。各取0.1 mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养,记录的菌落数分别为31、34、37,则每升原水样中大肠杆菌数为____。该数据理论上比细菌实际数目____。 

              (4) 该实验中需要灭菌的是_____________。(至少写3个) 

            • 7.

              果蝇肠道中有包括醋酸杆菌在内的多种微生物,对其进行了分离、研究。

              (1)分离醋酸杆菌:培养基中加入一定浓度甘露醇既可为醋酸杆菌提供________,又能抑制其它肠道微生物的生长,因此可作为___________培养基用于分离醋酸杆菌。实验中剥取果蝇肠道并用__________(蒸馏水/无菌水/生理盐水)冲洗,将所得液体涂布于已制备的培养基中,分离得到醋酸杆菌。

              (2)为研究醋酸杆菌对果蝇生长发育的影响,研究者分别使用含肠道微生物(A组)、无菌(B组)、醋酸杆菌(C组)的培养基喂养无菌果蝇,测定蛹形成的平均时间,结果如图。

              据图可知,醋酸杆菌对果蝇蛹形成具有_________作用,酵母粉含量为_________时作用最显著。若研究者利用此实验证实醋酸杆菌在肠道微生物中起主要作用,则需补充D组的实验处理为_____________。

              (3)从细胞结构来看,醋酸杆菌属于_________生物,可在细胞的_________中将醇类、糖类分解为乙酸。醋酸杆菌可降解纤维素,有助于果蝇消化吸收营养物质,果蝇采食时携带醋酸杆菌,利于其传播,二者形成了__________关系。

              (4)研究表明果蝇大脑分泌的一种蛋白类激素——促胸腺激素(PTTH)在果蝇生长发育过程中可促进蛹形成,预测醋酸杆菌可___________(提前/延迟/不影响)果蝇PTTH峰值出现的时间。

              (5)综上所述,醋酸杆菌影响果蝇生长发育的原因是:___________________________________

            • 8. 亚洲人体内普遍缺乏乳糖酶,造成饮用牛奶后出现肠胀、腹胀、腹泻等不良症状。某牛奶制品生产厂家致力开发新产品,生产低乳糖新品,欲筛选出高产乳糖酶的微生物,制备乳糖酶并固定化,具体步骤如下:

              根据相关信息,回答下列问题:

              (1)筛选产乳糖酶的微生物时,宜用___________作为培养基中的唯一碳源。

              (2)固定化酶常用的方法是________________________________________________

              (3)科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定乳糖酶,以研究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。研究结果如下图所示。酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率,包括____________和____________等方面,根据图示信息,在____________的条件固定化酶催化效果较好。

               

              (4)实验者还进行了海藻酸钠固定化乳糖酶及化学结合法固定化乳糖酶的催化效果的比较研究,发现用____________法固定化酶的效果更好,原因可能是_________________________ 

              (5)工业生产中,使用固定化酶和使用游离酶相比,优点是_________________________ 

            • 9.

              回答下题:

              (一) 酿酒、造醋是我国的传统技艺,为了探究与改进制造工艺,进行了相关研究。请回答有关问题:

              (1)目的菌株筛选后应该利用     培养基进行扩大培养,       是消除污染杂菌的通用方法。

               (2)制作葡萄酒过程中,为了酵母菌迅速发生作用,可加少量      混匀。将葡萄浆放入发酵瓶,装量不超过      (A.1/2 B.2/3 C.3/4 D.100%),当发酵瓶       表示发酵完毕。

               (3)醋的制作中发酵瓶中装锯末至       ,将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒-水混合物中,混匀,并调PH至       后,倒入发酵瓶。

              (二)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。请回答相关问题:



              (1)过程①中构建重组表达载体所需要的酶是限制性核酸内切酶和      。(A.DNA聚合酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.解旋酶)

              (2)在过程②中,用       处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞,置于    中培养。

              (3)在过程③中,一般用     激素处理供体母牛,使其超数排卵;对供体母牛和代孕母牛进行           处理。

               (4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是          。在胚胎移植前,通过                技术可获得较多胚胎。

            • 10. 玉米是重要的粮食作物,经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下:                                                                               
              (1)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时,该水解产物为酵母菌的生长提供________。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或稀释涂布平板法计数。

              (2)玉米胚芽油不易挥发,宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。

              (3)玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用,从而降低生产成本。

              (4)利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时,需用耐高温的_______催化。PCR一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、_______和_______三步。

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