[生物·选修1：生物技术实践]

微生物的培养在生物科学史和现代生物工程中都是极其重要的基础技术。下图1是某学生重复艾弗里证明DNA是遗传物质实验的其中一组实验；下图2是基因工程中运用影印法将培养基A上的菌落按原来方向印在培养基B上，以检测重组质粒是否导入大肠杆菌的示意图，请据图回答下列问题。

（1）图1、图2的培养结果显示，两实验中使用的都是         （填物理状态）培养基

     ①酒精灯 ②接种环  ③高压蒸汽灭菌锅  ④培养皿

（3）培养基灭菌是避免杂菌污染的有效途径之一。适用于图1、图2所示培养基的灭菌方法是                        ；接种前还需检测灭菌效果。方法是将                   置于恒温箱中，在适宜温度下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（4）实验证明，上述两项实验中R型菌和大肠杆菌的转化率都很低。为获得图1、图2所示的培养结果，一是要设法提高图1中S型菌的                                ；二是要使用恰当的方法接种。两实验都不能用平板划线法和稀释涂布平板法接种，而应采用不加稀释的涂布平板发接种R型菌和大肠杆菌，理由是                                     。接种培养4天后，可通过观察             的形态特征来识别R型菌和大肠杆菌。

【生物—选修1：生物技术实践】

请回答下列有关微生物培养的问题：

（1）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，为了获得耐高糖、耐酸特性的酵母菌菌种，可以对野生酵母菌菌种进行诱变处理，然后在__________（培养基的物理状态）培养基上进行培养，该培养基要在基本培养基上额外添加______________________。

（2）若要用酿造果酒的装置酿造果醋，需要改变的环境条件是                      。

（3）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、KCl、H₂O。若用于培养纤维素分解菌，应加入____________，为检验纤维素分解菌的存在与否，还应加入__________。

（4）安徽怀远盛产石榴，石榴酒也是当地的特产。利用石榴发酵制作石榴酒的过程中，发酵装置内加入石榴汁后要留出约1/3的空间，目的是____________________________。

（5）筛选乳酸菌时可选用平板划线法或______________________接种，培养基中的尿素可为乳酸菌生长提供__________。

【选修1】《生物技术实践》

         让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制

（1）现代科学研究表明，许多种微生物参与了豆腐的发酵，比如________、________、曲霉和毛酶，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种_______状真菌。

（2）传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自                      。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以                                      。

（3）加盐的作用是                        和                               。

（4）卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在________左右。加酒的作用是______________和___________。

Ⅱ．分解纤维素的微生物的分离

（1）纤维素：由_________组成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。

（2）纤维素酶：是一种复合酶，至少包括三种组分，即_____、_______和_________。前两种酶使纤维素分解成____________。

（3）纤维素分解菌的筛选：采用_______染色法。采用以_______为惟一碳源的培养基。

（4）为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行_______________的实验。纤维素酶的发酵方法有_______发酵和_______发酵两种。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后产生的葡萄糖进行定量的测定。

[生物——选修1：生物技术实践]

根据所学知识回答下列问题：

（1）在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？         （“能”或“不能”）。请说明理由：         。

（2）在食品加工业中，使用量最大的酶制剂果胶酶是由          发酵生产的。

（3）在筛选纤维素分解菌的过程中，常用的方法是                。但这只是分离纯化的第一步，为了确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行

                  的实验。

（4）采用萃取法从胡萝卜中提取胡萝卜素的主要步骤依次是：粉碎、干燥、萃取、过滤、浓缩，其中的干燥过程应控制好时间和温度，以防止

                   ，而萃取过程应采用水浴加热，这是因为                              。

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行                ，一般操作方法 有两种，下图是利用                          法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出 现菌落且菌落周围             消失或减少，说明该菌落中的菌株具

有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                  直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                                 。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”某同学进行了如下实验:

请分析回答下列问题：

（1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的        作为凝固剂。

（2）接种微生物的方法有很多，图中过程①②③所示的方法为                 。用该方法统计样本菌落 数后，所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/ml），这里的n=        ．用该方 法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是                                   。

（3）为了检测某乳酸菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养 箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A，B，C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不 同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A______（填“敏感” 或“不敏感”）；含C滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是                 。

【生物一选修1生物技术实践】

   牛、山羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种厌氧微生物。为了分离出高效的纤维素分解菌，科学家从牛瘤胃中获取内容物，经过选择培养后，接种在鉴别培养基上初筛分离得到5个菌株，观察结果如下。

回答下列问题：

(1)培养该纤维素分解菌，除了需要适宜的温度、pH外，还需要在________环境中进行。

(2)将选择培养后的菌种接种在经________法灭菌的鉴别培养基上。培养基成分中的纤维素能与________形成红色复合物，该培养基属于________(填“液体”或“固体”)培养基。

(3)据表分析，________号菌株最可能具有较高产纤维素酶的能力且酶活性也较高，理由是________。为确定此结论可继续进行实验，对纤维素酶分解纤维素后所产生的________进行定量测定。

生产实践中应用的菌种主要来自土壤，从土壤中分离微生物的实验流程如下：

土壤取样—→选择培养—→梯度稀释—→鉴别培养。

请回答下列有关问题：

(1)将土壤浸出液接种到特定培养基上，可以将酵母菌从混杂的微生物群体中分离出来，

获得纯种酵母菌，这一过程叫做          。在培养酵母菌的过程中，对培养基、接种环常采用的灭菌方法分别是                     。

(2)在使用酵母菌发酵生产酒精的过程中，影响酵母菌酒精发酵的主要因素有          ，常使用          的方法从发酵液中提取纯酒精。

(3)从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在          环境中采集土样，所选择的培养基应以          作为唯一碳源。

乳酸菌常用于制作酸奶等发酵食品。研究发现，乳酸菌还可产生乳酸菌素，抑制肉制品中致病菌和腐败菌的生长，起到生物防腐的作用。请回答下列问题：

（1）制作酸奶是利用乳酸菌在________（选填“有氧”或“无氧”）条件下，将牛奶中葡萄糖、乳糖分解成乳酸，同时将奶酪蛋白水解为短肽和________，不仅易被人体吸收，也适用于乳糖不耐症人群。若牛奶中含有抗生素，会影响酸奶的制作效果，原因是________。

（2）纯化乳酸菌时刻选用平板划线法或________接种，还需要设置未接种乳酸菌的培养基作为对照，若对照组培养基表面没有菌落生长，说明________。

（3）为探究不同种乳酸菌的抑菌效果，将稀释倍数相同的等量乳酸菌培养液滴加在长满致病菌的平板上，一段时间后，会出现以滴点为中心的抑菌圈，实验结果如下表。

①实验的因变量是________。

②由实验结果可知，乳酸菌对________（填致病菌的名称）的抑菌效果最为突出；在生产应用中，不宜采用________号菌株进行防腐。