T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T₁代）。

（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除_______________，因为后者产生的

_________会抑制侧芽的生长。

（2） 为筛选出已转化的个体，需将T₁代播种在含____________的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T₂ 代）。

（3） 为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T₂代播种在含___________的培养基上，获得所需个体。

（4）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性______。

（5）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取_________植株的DNA，用限制酶处理后，再用__________将获得的DNA片段连接成环（如图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取____________作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1)图中的结构A是________，其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加________，整个实验过程应保持________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A.引物Ⅰ：···GGGAATTC···；引物Ⅱ：···CTCATATG···

B.引物Ⅰ：···GAATTCCC···；引物Ⅱ：···CATATGAG···

C.引物Ⅰ：···GGAAGCTT···；引物Ⅱ：···AAGCTTCC···

D.引物Ⅰ：···CTCATATG···；引物Ⅱ：···AAGCTTAAGCTT···

嗜热菌可以生活在98 ℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1) 图中的结构A是__________，其主要作用是提供_______________特异性识别结合位点，驱动基因转录。一个完整的基因表达载体的组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有______________。

(2) 用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用__________两种限制酶进行切割

(3) 将重组质粒导入大肠杆菌细胞之前，一般需先用______溶液处理大肠杆菌，以便将基因表达载体导入细胞。重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加__________，整个实验过程应保持____________操作。

(4) PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A. 引物Ⅰ：…GGGAATTC…；引物Ⅱ：…CTCATATG…

B. 引物Ⅰ：…GAATTCCC…；引物Ⅱ：…CATATGAG…

C. 引物Ⅰ：…GGAAGCTT…；引物Ⅱ：…AAGCTTCC…

D. 引物Ⅰ：…CTCATATG…；引物Ⅱ：…AAGCTTAAGCTT…

玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：

（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用___________法或____法从玉米胚芽中提取。

（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。

（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的__________催化。PCR技术一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1)图中的结构A是________，其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加________，整个实验过程应保持________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A.引物Ⅰ：···GGGAATTC···；引物Ⅱ：···CTCATATG···

B.引物Ⅰ：···GAATTCCC···；引物Ⅱ：···CATATGAG···

C.引物Ⅰ：···GGAAGCTT···；引物Ⅱ：···AAGCTTCC···

D.引物Ⅰ：···CTCATATG···；引物Ⅱ：···AAGCTTAAGCTT···

PCR是聚合酶链式反应的缩写，利用PCR技术可对目的基因进行扩增。请回答有关问题:

(1)PCR的原理是                     。

(2)PCR技术使DNA解链是通过           实现的，PCR技术中       提供能量。

(3)DNA解链后冷却的目的是让           与           相结合。

(4)当温度加热至70～75℃时，是 酶把单个脱氧核苷酸，通过 键连接到引物上。如此逐渐延伸形成互补链，进而使目的基因加倍。

(5)通过重复循环(2)、(3)、(4)过程，经过n次循环需要       个引物。 

某实验小组以洋葱组织为实验材料，进行DNA粗提取和鉴定的实验，实验主要过程如下图，回答下列问题：

（1）步骤一中需加入一定量的洗涤剂和    对洋葱组织进行处理，加入前者是的目的是               ，加入后者的目的是            。将搅拌和研磨后的物质进行过滤，即可得到含有DNA的滤液。

（2）步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤，可以采用以下几种不同的方法：

①滤液中NaCl浓度在      mol／L时可分离出DNA，若要再次提纯，需要将其溶解在2mol／L的NaCl溶液中；

②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，其目的是         ；

（3）步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是___     _，得到纯净的DNA后，可利用DNA与            在沸水浴条件下会被染成    色，来对其进行鉴定。

（4）提取出的DNA继续进行PCR，一般经过    次循环，每次循环经过     、            、       三步。

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

（1）我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得     、     、延熟的转基因作物。

 （2）引物是根据           的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是                                       。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要在                            。

（3）PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是                          。

（4）检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。

 据图分析：含有三种转基因的农作物是____    ，判断依据是                                            。

 （5）与PCR技术相比，多重PCR技术的优势                             。