下列甲、乙两图为获得生物新品种的过程示意图。请据图回答下列问题。

（1）检测目的基因是否转录出mRNA的检测方法是采用        技术。

（2）乙图为获得抗虫棉技术的流程。图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是       。在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kanR）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。因此，C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入         。

（3）随着科技发展，获取目的基因的方法也越来越多，乙图中的“抗虫基因”是利用甲图中的方法获取，③是在           （填“酶的名称”）作用下进行延伸的。

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用    和    两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过   酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于    态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加    ，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中   。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为    ，对于该部位，这两种酶   （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得    种大小不同的DNA片段。

（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供________。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或稀释涂布平板法计数。

（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。

（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。

（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的_______催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。

（1）体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中应用__________。

（2）Taq DNA聚合酶是从水生耐热细菌Taq中分离的。

①Taq DNA聚合酶的功能是催化脱氧核苷酸之间形成____________________。

②Taq DNA聚合酶的化学本质为蛋白质，可用________法和__________法进行分离。

（3）相对于细菌分离，DNA分子的分离和提取操作要复杂的多。

①在DNA提取中两次用到蒸馏水，其目的分别是____________、_____________。

②实验中能否以哺乳动物成熟的红细胞为实验材料？为什么？__________________。

（4）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在________________中才能进行，并且要严格控制________条件。

（5）PCR中加入的引物有____________种，加入引物的作用是作为______________________的起点。

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答：

(1)①过程获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，该技术必须用________酶，所需的原料是_____________。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、________和________三步。

(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表：

 用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是__________________________________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用____________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(3)图中⑤、⑥依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的________、________过程。

(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是______________________________________________________________________________________________________________________。

将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条DNA单链分开，叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复成为双链DNA，叫做退火。

(1)低温条件下DNA不会变性，说明DNA有______________________特点，从结构上分析原因有：外侧__________________________________，内侧碱基对遵循____________________

(2)某DNA完全解旋成单链所需的温度明显高于其他DNA，其最可能的原因是___________________________________________________________________________。

(3)大量如图1中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成________种DNA，离心后如图2，则位于________链位置上。

(4)图1中α链中A和T的比例和为46%，则DNA分子中A和C的和所占比例为________，若此DNA由1000个碱基对组成，则其连续复制3次共需要消耗G______个，第3次复制需要消耗G_______个。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是               ，  采用                  技术可以获得多头基因型相同的转基因牛。

（2） 转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有        。

A.人生长激素基因的启动子     B.牛生长激素基因的启动子

C.人乳腺蛋白基因的启动子     D.牛乳腺蛋白基因的启动子

启动子的作用是能够被____________________识别和结合，从而启动转录过程

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞具有                                                       的特点。

（4）在抗虫油菜培育过程中，应将抗虫基因基因转移到Ti质粒的              上；④过程最常采用的方法是                         ；⑤过程采用的技术是                    ；在分子水平上可采用                    方法来检测转基因抗虫油菜的抗虫基因是否成功表达。

（5）下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

① 从基因组文库中获取目的基因   ② 利用PCR技术扩增目的基因  

③ 构建cDNA文库               ④ 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因     

A．①②    B．②③    C．①③     D．①④

据图回答：

（1） 获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在                酶的催化作用下，合成互补的单链DNA，然后在                    的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的                序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的                     序列，再通过化学方法合成所需基因。

（2） 利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有              、             、4种脱氧核糖核苷三磷酸和                  ，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3） 结构B的基本组成单位是                      ，由A和载体B拼接形成的C通常称为                       。

（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是                                   。

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请根据上述材料回答下列问题：

（1）图中过程②常用的方法是                 ；过程③利用的生物技术是              ；在进行过程④前，利用          技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、        、        、         等部分。

（3）cDNA属于        基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过              产生cDNA片段，与           连接后储存在一个受体菌群中。

（4）PCR是一项利用DNA复制的原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。其基本过程是：加热至90～95℃使          →冷却至55～60℃使         结合到互补DNA链→加热至70～75℃使         从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行。

请依材料所给出的信息分析回答下列问题：

（1）在基因工程操作程序中，                是基因工程的核心，为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的         和       之间。

（2）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg^2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、              和                 。

（3）据材料Ⅱ，在过程②中，将成纤维细胞置于5％CO₂的气体环境中，CO₂的作用是         。在过程③中，用           处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行          处理。

（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是               。在胚胎移植前，通过             技术可获得较多胚胎。