（1）农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有__________________________________的特点。图中D过程的方法称为____________________。A过程所需的酶是_____________________________。

（2）图中重组质粒，除了含有目的基因外，还必须有________________________和复制原点；培育转基因玉米成功的标志是____________________________；目的基因能否遗传给后代常采用的检测方法是_______________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤。请回答下列问题：

（1）基因工程操作的核心步骤是                              。

（2）cDNA文库的构建方法为                   。

（3）限制酶、DNA连接酶和              是基因工程的基本操作工具。其中限制酶的特点是                                    。

（4）Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝尔奖，PCR技术中需要的酶是          ，若PCR进行30轮循环，理论上可获得    个基因片段。

（5）将目的基因导入动物受体细胞的方法是                    。

（6）周光宇教授提出的花粉管通道法为我国的转基因抗虫棉作出重要贡献。请写出分子水平检测抗虫棉基因是否表达的方法        及个体水平鉴定的方法            。

已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。

回答下列问题：

(1)为了获得丙种蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙种蛋白质的________序列，据此可利用________方法合成目的基因。获得丙种蛋白质的基因还可用________和________方法。

(2)在利用上述丙种蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需要使用________酶和________酶。

(3)将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗________的危害。

(4)若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，则该植株的种子________(填“含有”或“不含”)丙种蛋白质基因。

研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是（ ）

【生物——选修3：现代生物科技专题】

I．科学家将人的生长激素基因与pBR322质粒进行重组，得到的重组质粒导入牛的受精卵，使其发育为转基因牛，再通过细胞工程培育为转基因克隆牛。pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点(如图2)。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题。

(1)图1中显示的人的生长激素基因是通过人工合成的，图中①过程需要的酶是__________。该过程所依据的碱基互补配对原则是___________________________(用字母和箭头表示)。

(2)图1中的mRNA是从人体的_______________细胞中获取。

(3)重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示：

如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的___________________________________，即目的基因插入了___________________中。

II．SRY基因是Y染色体上的性别决定基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术能准确鉴定早期胚胎性别，应用前景十分广阔。请回答相关问题：

用SRY—PCR法鉴定胚胎性别需要充足的材料并保证被测胚胎的活性，因此，首先从被测胚胎中取出几个细胞，提取_______________，然后用________________的一段脱氧核苷酸序列作引物，进行PCR扩增。鉴定扩增产物，制备具有SRY基因特异性的探针，出现阳性反应者，胚胎为__ ___性。

[生物一选修3现代生物科技专题]

   人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如下：

（1）从图可知，该目的基因的具体功能是________。目的基因在人体细胞和大肠杆菌细胞中均能表达出相同的抗原，这是因为________原因所致。

（2）若要迅速获取大量的目的基因，常用的技术是（写中文全称）________。过程①合成重组质粒需要限制酶，还需要________。过程②常需要________处理大肠杆菌细胞，促使转化完成。

（3）要形成有效的重组质粒，选择适当的限制酶很重要，图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA分子中的具体切点。

要成功转入目的基因，可有两种选择限制酶的方案，分别是________或________。其中有一种方案重组效率较高，可以避免出现自身环化。

(1)图中①～⑤所示的生物工程为________。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的________，对现有的基因进行改造，或制造出一种新的________，以满足人类生活的需求。

(2)图中序号④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板碱基写在前)。

(3)若大量扩增目的基因，则用的是________(写出全称)技术，该过程需要的聚合酶的特点是________。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，在基因的首端必须有________；且在图中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含________性染色体的精子。

据图回答：

(1)获得A的一条途径是以A的mRNA为模板，在　　　　   酶的催化下，合 成互补的单链DNA，然后在　　　　的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因。

(2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有　　　　、模板、4种脱 氧核糖核苷三磷酸和　　　　，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为　　　　。

(4)在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是　　　　           。

（1）该技术定向改变了酵母菌的性状，这在可遗传变异的来源中属于______。

（2）从大麦细胞中可直接分离获得LTP1基因，还可采用__________方法获得目的基因。本操作中为了将LTP1基因导入酵母菌细胞内，所用的运载体是_________。

 （3）要使运载体与LTP1基因连接，首先要进行切割。假如运载体被切割后，得到的分子末端序列为  则能与该运载体连接的LTP1基因分子末端是_______。

（4）切割完成后，将运载体与LTP1基因连接，连接后得到的DNA分子称为______。

（5）此操作中可以用分别含有青霉素、四环素的两种选择培养基进行筛选，则有C进入的酵母菌在选择培养基上的生长情况是___________。