回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1)图中的结构A是________，其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加________，整个实验过程应保持________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A.引物Ⅰ：···GGGAATTC···；引物Ⅱ：···CTCATATG···

B.引物Ⅰ：···GAATTCCC···；引物Ⅱ：···CATATGAG···

C.引物Ⅰ：···GGAAGCTT···；引物Ⅱ：···AAGCTTCC···

D.引物Ⅰ：···CTCATATG···；引物Ⅱ：···AAGCTTAAGCTT···

[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤。请回答下列问题：

（1）基因工程操作的核心步骤是                              。

（2）cDNA文库的构建方法为                   。

（3）限制酶、DNA连接酶和              是基因工程的基本操作工具。其中限制酶的特点是                                    。

（4）Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝尔奖，PCR技术中需要的酶是          ，若PCR进行30轮循环，理论上可获得    个基因片段。

（5）将目的基因导入动物受体细胞的方法是                    。

（6）周光宇教授提出的花粉管通道法为我国的转基因抗虫棉作出重要贡献。请写出分子水平检测抗虫棉基因是否表达的方法        及个体水平鉴定的方法            。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

菊天牛是菊花的主要害虫之一，为达到防治目的，科研人员通过转基因技术培育出了抗虫菊花。请回答下列问题：

（1）可用处理土壤农杆菌，使其处于以便吸收重组质粒。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的上，最终形成转基因植株。

（3）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的的基因时，需根据的脱氧核苷酸序列设计特异引物，以为模板进行第一轮扩增。

（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示：

①对照组应饲喂等量的菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物。

②据表分析，实验组与对照组差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

【选修3：现代生物科技专题】

     精子载体法是以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精形成受精卵，在体外培养成胚胎后移入代孕母体，从而获得转基因动物。请回答下列问题。

（1）将目的基因导入精子之前需要构建基因表达载体，基因表达载体包括目的基因、                            。目的基因导入精子的方法常用                 。

（2）外源基因能够整合到精子的                  上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的                 才能进入卵细胞中，受精之前需要对精子进行         处理。

  （3）胚胎移植时，受体应处于适合的生理状况，此时可利用激素对受体进行处理，一般采用的激素是                          ．此外，受体对移入子宫的外来胚胎                             ，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

请回答下列有关基因工程和胚胎工程的问题：

（1）在基因工程中，获取目的基因的方法包括：①从基因文库中获取目的基因，②利用________扩增目的基因，③________。

（2）在基因表达载体中，启动子是________识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是________。

（3）将目的基因导入微生物常用________处理受体细胞，使之变成感受态细胞。我国科学家发明的将目的基因导入植物细胞的方法是________。

（4）研究还发现胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞，这体现了胚胎干细胞具有________。临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决了________问题。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：

（注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）

（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是_        __，此外还可用                 作为载体。

（2）下图限制酶M和N切割产生的黏性末端是__ ____ ____ __，连接它们所需要的基本工具是__              ________。

（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__  _____处理，使其处于感受态。

（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及___________和  ________ 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了__  __次。

（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

请据表回答：

①对照组应饲喂等量的__                ________                __。

②据表分析，__               ____            __差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

[生物—选修3现代生物科技专题]

阅读如下资料：

资料甲：试管婴儿技术是指采用人工方法将卵子与精子从人体内取出并在体外受精，发育成胚胎后，再移植回母体子宫内，以达到受孕目的一种技术。

资料乙：干扰素α—1b是我国第一个批准生产的基因工程药物，该药物利用大肠杆菌作为受体获得，具有抗病毒、抑制肿瘤细胞增生、调节人体免疫功能的作用，广泛用于病毒性疾病和多种肿瘤的治疗，是当前国际公认的病毒性疾病治疗的首选药物和肿瘤生物治疗的主要药物。

资料丙：DNA的粗提取的原理就是利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分；可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反应，鉴定DNA的存在。

回答下列问题：

（1）资料甲：顺利受精必须满足两个条件：来自父方的精子要进行________，来自母方的卵母细胞要培养至________。

（2）资料乙：为使干扰素基因在大肠杆菌细胞内表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的________和________之间。

（3）资料丙：在DNA的析出与鉴定步骤中，析出DNA时应将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的________（写出体积分数），静置后溶液中会析出DNA。鉴定时所用的试剂为________。

 35、如下图所示为农作物新品种的育种方式：

（1）图示育种方式涉及到的生物工程技术有：____________、______________．

（2）②③过程分别为：______________、  ___________．

（3）⑤过程中常用的载体是____________；⑤过程表示的基因操作步骤是___________________________________________．

（4）上述育种与传统杂交育种相比，突出优点是__________________________．

（5）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取___________作为外植体．

请回答胚胎工程和基因工程方面的问题

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、                     、                          以及在母体中发育和产出等过程。

（2）培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和                        。

（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是                       。

（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的核心操作步骤是基因表达载体的构建，若要获得的转基因牛只在分泌的乳汁中含有人干扰素，则需给人干扰素基因加入牛乳腺分泌蛋白基因的                  。

（5）为从转基因牛的乳汁中获得大量人干扰素，该基因表达载体应导入的受体细胞是           ，并且在移入代孕黄牛之前还需做                         。