人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体构建重组表达载体需要用到的工具酶有__________。基因表达载体中除了要有目的基因以外，还要有启动子，它是_________识别和结合点部位；除上述外还需有_____________________。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。

（2）为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵，采集的卵子必须发育到________(时期)；采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。生产上常用________期的胚胎进行移植；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。利用______________技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如下图所示，有关叙述正确的是

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

（1）在基因工程中，A→B为_____________技术，利用的原理是_______________。其中①为________过程，冷却至55℃将a________结合到互补链上，②过程由热稳定DNA聚合酶催化从a起始合成子链。

（2）⑤过程是基因表达载体的构建，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有____________________以及标记基因等。

（3）抗虫基因导入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称______。目的基因导入植物细胞的方法除上图所示以外，还包括_________和_________。检测目的基因能否在棉株体内稳定存在方法是_________________。如要检查棉株是否最终获得抗虫性状，则需要在________水平上进行检测。

将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯徳毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资枓：

资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达（5′AOX1和3′AOXl（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。

资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。

资料3:限制酶酶切位点

（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应在图2中HBsAg基因两侧的A和B位置接上_______限制酶识别序列，这样可避免质粒和目的基因自身环化。

（2）为确认巴斯德毕赤酵母茵转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用___________方法进行检测。

（3）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入___________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。   

（4）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行___________并分泌到细胞外，便于提取。

（5）下图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是:GGTTATGCGT，请解读图2显示的碱基排列顺序：______________________。

害虫损伤番茄的叶片后，组成叶片细胞的细胞壁能释放出一种类激素物质，这种物质可以扩散到番茄的其他部位，诱导细胞内蛋白酶抑制剂基因的表达，合成蛋白酶抑制剂，导致害虫不能消化食物而死亡。科学家利用转基因技术把番茄的蛋白酶抑制剂基因转移到玉米，使玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，有效抵御了玉米螟对玉米的危害。请结合上面的材料回答：

(1)转移到玉米的番茄抑制剂基因最可能与玉米的__________结合在一起，成为玉米________________的一部分。

(2)转移了番茄蛋白酶抑制剂基因的玉米合成番茄蛋白酶抑制剂的具体部位是_____________，合成的化合物可能还需要在_____________________加工才具有生物活性。

(3)这种抗玉米螟玉米品种的培育技术属于_____________技术，这种变异在生物学上称为________________。

(4)在种植了这种转基因玉米的农田中杂草是否也会出现抗玉米螟性状？________，原因是_________________________________________。