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            • 1． （2016•金山区一模）苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．下图（一）是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；下图（二）是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的二种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题．
              （1）将图（一）①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有    种DNA片段．过程②需要用到    酶．
              （2）假设图（一）中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图（一）中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？    ，请说明理由    ．
              （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒    
              A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开       B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开
              C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开   D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开
              （4）图（二）中α链是    ．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点    （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是    ．
              难度：较难
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            • 2． 科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图．

              （1）A为含目的基因的（基因）表达载体，其化学本质是    ．
              （2）过程①中用到的工具酶有    将A导入绵羊胎儿成纤维细胞中常用的方法是    ．
              （3）核移植的受体应选用    期卵母细胞．在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是    ．重组细胞能发育成绵羊，是因为细胞核中具有    ．
              （4）移植应选择胚胎发育到    阶段时进行；代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生    ，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能．
              难度：较难
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            • 3． 普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏．科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄．如图为操作流程图，据图回答问题．

              （1）实验中的目的基因是    ．
              （2）构建基因表达载体时必需的工具酶有    ．
              （3）图中步骤①→②使用的生物技术是    ．这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状，其原因是    ．
              （4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因．    
              （5）若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3：1，则可推测目的基因整合到了    ．
              A．一对同源染色体的一条上         B．一对同源染色体的两条上
              C．两条非同源染色体上             D．一对同源染色体的非姐妹染色体上．
              难度：较难
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            • 4． GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

              （1）完成图中A过程必需的工具是    ；该基因治疗的受体细胞为    ．
              （2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的    限制酶进行酶切．
              （3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是-C↓AATTG-和-G↓AATTC-．如图2表示四种质粒，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示GDNF基因运载体的是    ．

              （4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是    （多选）．
              A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
              B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
              C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
              D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
              （5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为    个，反向连接的重组载体产生片段有    （多选）．
              1100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp．
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            • 5． 如图是利用生物学技术制备单克隆抗体的两条途径模式简图．请据图回答相关问题．

              （1）经过程①依据的原理是    、    ，通常用    诱导融合；过程②至少需要    次筛选才能得到X细胞．
              （2）过程④所用的酶为    ．过程⑥常用    处理大肠杆菌．
              （3）结构甲为    ，结构甲组成的基本原件必须包括启动子、终止子、复制原点、    及    等．
              （4）利用上述技术也可以生产干扰素（糖蛋白），但是用大肠杆菌只能生产无糖干扰素，原因是    ．
              难度：较难
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            • 6． 回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

              （1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中    ，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．
              （2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的    键．
              （3）组成基因表达载体的单体是    ．基因表达载体中的启动子是    识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过    （填过程）合成mRNA．
              （4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？    
              （5）将受体细胞培养成植株需要应用    技术，该技术的理论依据是    ．
              难度：较难
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            • 7． 基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，如图中①-③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Ampr（氨苄青霉素）抗性基因和Tetr（四环素）抗性基因，其中在Tetr抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tetr抗性基因功能性失活），请回答：

              （1）如图中①过程所需的酶除DNA连接酶以外，需要的限制酶是    ．
              （2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果：A1是     A2是    ．
              （3）经过导入过程，B（受体细菌）可能出现结果是    （多选）
              A．导入未成功的细菌                   B．含A1的细菌
              C．含A2的细菌                        D．含A1和A2的细菌
              （4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括    ．
              （5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）    ．
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            • 8． 根据所学知识回答问题：
              （1）基因工程中基因表达载体除包括目的基因外，还必须有    及标记基因等．
              （2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的    中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的    中．植物组织培养的主要原理是植物细胞具有    ，具体过程是在    和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过    产生愈伤组织，最终形成完整的植株．
              （3）在哺乳动物的核移植实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到    阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．
              （4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）    ．
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            • 9． 以下是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

              （1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），图中细胞A在人体主要参与    免疫．
              （2）过程①的完成采用的主要方法是    ，依据的生物学原理是    ．过程④需要    酶．
              （3）在基因表达载体中，氨苄青霉素抗性基因的作用是    ，启动子的作用是    ．
              （4）如果想用棉花产生该种抗体，则⑥过程的受体细胞通常选用    ，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过    技术获得能产抗体的转基因棉花植株．
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            • 10． 回答下列有关生物工程的问题．
              Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1（图中数字序号表示的是相关过程）．

                                        图1

                                                图2 
              （1）在核移植前应去除    的细胞核．
              （2）过程②，重组胚胎培养到一定时期时，可从其    中分离出的ES细胞的特点是    ．
              （3）过程③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体，具体过程如图2．图中Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．可以根据Rag2基因的    设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，④过程采用的酶是    ，⑤过程采用的酶是    ．如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有    种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占    ．
              （4）在ES细胞培养液中加入    可以体外诱导定向形成造血干细胞．
              （5）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的    ，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验．
              难度：较难
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