7.
内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用,其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。内皮素(ET)主要通过与靶细胞膜上的ET受体(ET
A)结合而发挥生物学效应。ET
A是ET的主要受体。科研人员通过构建表达载体,实现ET
A基因在大肠杆菌细胞中的高效表达,其过程如下图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG,限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG。请分析回答:
(1)完成过程①需要加入缓冲液、原料、_______和引物等,过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃,其目的是_____________。
(2)过程③和⑤中,限制酶XhoI切割DNA,使__________键断开,用两种限制酶切割,获得不同的黏性末端,其主要目的是_________。
(3)构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子的作用是__________,除图示结构外,完整的基因表达载体还应具有____________等结构(至少写出两个结构)。
(4)过程⑥中,要用CaCl2预先处理大肠杆菌,使其处于容易吸收外界DNA的_______的细胞。
(5)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是_______________。
(6)_______________________,是检测目的基因是否发挥功能第一步。