（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶______________分别对_______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为_____种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________________作为标记基因。

（3）研究人员通常采用_________________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞

的________过程。

基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展运用，现在基因工程在动植物育种上有广泛而重要的应用。基因工程基本操作流程如图所示，请据图分析回答：

（1）图中A是________，最常用的是________；在基因工程中，需要在___________________酶的作用下才能完成剪接过程。

（2）不同种生物之间的基因移植成功，从分子水平上分析，进行基因工程的主要理论依据是__________________________也说明了生物共用一套____________。

（3）研究中发现，番茄体内的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，导致害虫无法消化食物而被杀死，人们成功地将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米体内，玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，玉米这种变异的来源是______________。

（4）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，并用基因工程的方法将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，经培养长成的植株具备了抗病性，这说明_________________。如果把该基因导入叶绿体DNA中，将来产生的配子中______（填“一定”或“不一定”）含有抗病基因。

材料一：为获得纯合高蔓抗病番茄植株，采用的方法如图1所示。请据图回答

（1）杂交育种方法是通过[①]___________将____________集中在一起，再通过[②]__________筛选出符合要求的稳定遗传个体。

（2）图中③需用秋水仙素处理_________，可快速获得纯合高蔓抗病番茄植株。

（3）将某杂草中的抗病基因（T）导入蕃茄叶肉细胞，获得的品种与原品种_____（填“属于”或“不属于”）同一物种。

（4）科研人员挑选出成功导入基因T的抗性番茄植株，其整合情况可能如图2所示（不考虑其他变异情况），请设计实验方案，确定导入基因T的位置和数量。

①实验方案：_______________________________________________________。

②实验结果及结论：

I．若________________________________，则如图甲所示；

II．若子代全部抗病，则如图乙所示；

III．若_______________________________，则如图丙所示。

材料二：若家蝇的长翅（A）对残翅（a）为显性，长肢（B）对短肢（b）为显性，且种群足够大，在随机交配后，表现型比例为长翅长肢63%，长翅短肢21%，残翅长肢12%，残翅短肢为4%，则基因型为AaBb和aaBb的个体所占的比例分别为________、________。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用________和_______酶处理两个基因后，可得到______端与_______端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入上图所示Ti质粒的T-DNA中，构建________________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用_________________将___________导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞。

（4）用_____________法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

（1）克隆动物培育过程与图示繁殖过程相比，特有的技术手段是__________。两种动物繁殖的方式相比，实质性的区别为前者是_____________，后者是_____________。

（2）一般用_____________激素对供体母牛做超数排卵处理。

（3）为了提高胚胎的利用率，可以采用______________技术处理早期胚胎，如果选择囊胚阶段的早期胚胎，在分割时需要注意________________。

（4）如果培育转基因荷斯坦奶牛，可采用____________技术将药用蛋白基因导入到受精卵中，并采用__________________技术检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了目的基因。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

(1)在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是_______，②过程常用的方法是______。要检测受精卵染色体上是否插入了目的基因可采用_________技术。

(2)转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有____________。

(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是________细胞，Ⅲ代表的细胞具有_____________的特点。

(4)若prG位于无限增殖细胞的细胞质中，有人提出用核移植的技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用图示过程及文字表示该过程。

(5)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是______________，⑤过程常用的激素是____________，采用的技术是___________。愈伤组织的特点是_____________________________________________________。

(6)下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

①从基因组文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③构建cDNA文库④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因

A．①② B．②③ C．①③ D．①④

假设A、b代表玉米的优良基因，这两种基因是自由组合的。现有AABB、aabb两个品种，为培育出优良品种AAbb，可采用的方法如图所示。请据图回答问题：

 (1)由品种AABB、aabb经过①②③过程培育出新品种的育种方式称为____________，其原理是__________。 

(2)若经过过程②产生的子代总数为1 552株，则其中基因型为AAbb的植株在理论上有________株。基因型为Aabb的植株经过过程③，子代中AAbb与aabb的比例为_________。

 (3)过程⑤常采用________________方法得到Ab个体。与过程①②③的育种方法相比，过程⑤⑥的优势是________________________________。

 (4)过程⑦的育种方式是________，与过程⑦比较，过程④的明显优势是____________。

人参是一种名贵药材，具有良好的滋补作用。口服α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ为限制酶，它们的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是            。科研人员还在两种引物的一端分别加上了              和             序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有             ，过程③中需先               处理根瘤农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过              过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                   。

（4）科研人员认为，将转干扰素基因的人参愈伤组织加工成的药物比单纯干扰素的疗效要好，其依据是                 。

下图表示以某种农作物①和②两个品种分别培育出④⑥品种的过程。

（1）利用①和②经过Ⅰ和Ⅱ培育⑤所采用的方法是__________。

（2） 由③培育出⑥的常用方法是用_____________处理____________________________。若用硫酸二乙酯直接作用于基因型为AABb的大量个体，则可能偶然得到品种⑤，这一过程利用的变异原理为___________。

（3） 如果在⑥的柱头上授以⑤的花粉，得到的种子种下去就会长出______倍体植株。

（4） 由③培育出④常用的方法是____________；再由④培育出⑤，这种育种方法的优点是__________________。

（5）除以上方法以外， 常用的育种方式还有基因工程，基因工程中必须用到的工具酶有___________。

将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示 。

（1）过程①需用同种______________酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（2）过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让____________________进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是___________________。

（3） 部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是________________________________ 。

（4）检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是_____________________________________。