据图回答下列问题：

(1)过程①所需的酶_____________________。

(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有__________________。

(6)对杂种植株进行________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

已知硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基及硅酸盐细菌培养基上均能生长。表1为无氮培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

(1)表1从物理性质上看属于________培养基，按用途划分，属于________培养基。

(2)硅酸盐细菌能在无氮培养基上生长，推测该细菌具有________功能。

(3)为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________附近进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

(4)为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

   [生物——选修3：现代生物科技专题]

如图所示为培育二倍体转基因抗虫棉的两种思路，其中EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，EcoRⅠ和BamHⅠ切割DNA形成黏性末端，SmaⅠ形成平末端。(箭头指向为对应的酶切位点。)回答下列问题：

(1)与思路2相比，思路1的最大优点是________。

(2)分析图可知，不宜选择SmaⅠ获取目的基因，理由是________；选择________酶，可避免目的基因和质粒的自身环化。

(3)基因工程获得抗虫棉的核心步骤是________。

(4)图①过程得到的重组质粒，除了图中标出的特殊DNA片段外，还应有________；将重组质粒导入植物细胞采用最多的方法是________，如采用该方法，则图中所用的质粒应为________。

(5)检测目的基因是否翻译的方法是________。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是                          。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？_______________。

（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？     。

（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为               。

（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到________种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到________种DNA片断。

（1）图中②所示的生物技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为________。

（2）重组细胞培养成囊胚过程所用的培养液与植物组织的培养基在成分上的主要区别是前者必须含有________。重组细胞培养过程中所需要的基本条件包括充足的营养、________、________、气体环境。

（3）④所示的生物技术名称是________，若想得到大量健康的胰岛B细胞的胰岛素基因，可利用________技术。

（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是________。该种基因治疗所属类型为________。

（1）与传统的杂交育种相比较，通过基因工程育种具有明显的优势，一方面能   ▲   ，另一方面能   ▲   。

（2）图中步骤①是基因工程的核心步骤，其构建“重组质粒”的目的是   ▲   。

（3）限制酶BamHⅠ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，在土壤农杆菌Ti质粒上有该酶的一个切点。一个Ti质粒分子经BamHⅠ切割前后，分别含有   ▲   、   ▲   个游离的磷酸基团。Ti质粒被限制酶BamHⅠ切割后所形成的黏性末端是   ▲   。

（4）步骤④所依据的原理是   ▲   。如在该过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是   ▲   。

CpTI蛋白是由豇豆的胰蛋白酶抑制基因（CpTI基因）控制合成的，该蛋白主要存在于细胞质基质中，具有广谱的抗虫特性。但细胞质基质中存在大量蛋白酶，使CpTI蛋白降解造成毒性减弱，因而转CpTI基因抗虫水稻抗虫能力不十分理想。2008年4月3日《参考消息》报道，中科院遗传与发育生物学研究所朱桢等已培育出一种转SCK基因抗虫水稻品种，与转CpTI基因抗虫水稻相比，对害虫的致死率大大提高。SCK基因是由他们对CpTI基因进行修饰而成，SCK基因指导合成的CpTI蛋白被固定在内质网中，因此转SCK基因水稻对害虫的致死率大大提高了。

（1）SCK基因水稻细胞中CpTI蛋白含量高的原因是___________________________。

（2）基因工程是在____________水平上进行设计和施工。

（3）质粒DNA分子上有特殊的            基因，如抗生素抗性基因、色素基因等，供重组DNA的鉴定和选择。

（4）为了检测转基因水稻中SCK基因是否插入到水稻染色体的DNA上，需要采用    技术，从转基因水稻中提取出DNA，用放射性同位素标记的          作探针进行检测；为了鉴定SCK基因导入水稻细胞后，是否赋予了水稻抗虫特性，在个体生物学水平上需要做抗虫的           实验，以确定__________________________________________。

 （1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导入受体细胞，第四步是          ▲         

①通常在第一步和第二步的操作中需要相同的工具酶是          ▲           

②利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在   ▲     酶的作用下延伸形成DNA。

③采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞后，培养该细胞再生成植株的过程中，往往需要使用植物激素，人为地控制细胞的           ▲          。

④如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括     ▲            （多选）。

    A．生物安全  B．环境安全    C．食品安全    D．伦理道德问题

⑤蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的        ▲            序列，所以蛋白质工程实质是对基因直接操作的。

（2）请回答下列有关单克隆抗体制备的问题：

①与动物细胞融合过程相比，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用    ▲      ，以获得原生质体。

②骨髓瘤细胞和产生免疫反应的动物的脾脏细胞中的B淋巴细胞融合时，由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行            ▲        ，且要适时克隆化培养。

（3）请回答下列有关胚胎工程的问题：

   ①在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是       ▲        ，

     以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

   ②人类的胚胎发育过程中，细胞分化开始于    ▲        阶段。

(1)该生产流程中应用到的现代生物技术有________________________、________________________。(写出其中两种)

(2)图中A、B分别表示________________________________________、________________________________。

  近期，中国和韩国的科学家利用某项技术去掉了猪体内的肌肉生长抑制基因，然后把这些“改造过的基因”植入猪的受精卵中，进而发育成肌肉细胞生长不受限制的“肌肉猪”。回答下列问题：

(1)利用体外受精的方法获得猪的受精卵时，采集卵母细胞时，可用 _______激素处理母猪，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，卵子在与______的精子在体外受精前，__________ （填“需”或“无需”）在体外经人工培养。

(2)将“改造过的基因”导入受精卵（而不是体细胞）的原因是__________________________________________。

(3)“改造过的基因”需与________拼接成重组质粒，再利用_________法将其导入受精卵。而将目的基因导人双子叶植物时常采用________法。

(4)将具有“改造过的基因”的受精卵培育成“肌肉猪”需涉及胚胎工程，该工程最后一道“工

序”是______________。

（1）若使人乳铁蛋白基因在转基因奶山羊的乳腺细胞中特异性表达，在构建基因表达载体时，应在重组质粒中插入                        的启动子。

（2）为检测人乳铁 蛋白基因是否成功表达，可采用_____________技术。

（3）若欲获取多只具有相同遗传物质的转基因奶山羊，可在过程①使用____________技术。

（4）过程②需选用传代培养10代内的转基因奶山羊供体细胞，其原因是这样的供体细胞能维持正常的________核型；将该供体细胞注入______的卵母细胞，可构建出克隆胚胎，最终培育出转基因克隆奶山羊。