下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯徳毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资枓：

资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达（5′AOX1和3′AOXl（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。

资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。

资料3:限制酶酶切位点

（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应在图2中HBsAg基因两侧的A和B位置接上_______限制酶识别序列，这样可避免质粒和目的基因自身环化。

（2）为确认巴斯德毕赤酵母茵转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用___________方法进行检测。

（3）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入___________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。   

（4）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行___________并分泌到细胞外，便于提取。

（5）下图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是:GGTTATGCGT，请解读图2显示的碱基排列顺序：______________________。

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶______________分别对_______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为_____种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________________作为标记基因。

（3）研究人员通常采用_________________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞

的________过程。

基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展运用，现在基因工程在动植物育种上有广泛而重要的应用。基因工程基本操作流程如图所示，请据图分析回答：

（1）图中A是________，最常用的是________；在基因工程中，需要在___________________酶的作用下才能完成剪接过程。

（2）不同种生物之间的基因移植成功，从分子水平上分析，进行基因工程的主要理论依据是__________________________也说明了生物共用一套____________。

（3）研究中发现，番茄体内的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，导致害虫无法消化食物而被杀死，人们成功地将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米体内，玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，玉米这种变异的来源是______________。

（4）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，并用基因工程的方法将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，经培养长成的植株具备了抗病性，这说明_________________。如果把该基因导入叶绿体DNA中，将来产生的配子中______（填“一定”或“不一定”）含有抗病基因。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用________和_______酶处理两个基因后，可得到______端与_______端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入上图所示Ti质粒的T-DNA中，构建________________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用_________________将___________导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞。

（4）用_____________法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有___________，步骤③中需先用__________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（4）用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，而转基因植株在第22天才进入平台期，但此时的病情指数为79。说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有__________________________________。

昆虫学家用人工诱变的方法使昆虫产生基因突变，导致酯酶活性升高，该酶可催化分解有机磷农药．近年来已将控制酯酶合成的基因分离出来，通过生物工程技术将它导入细菌体内，并与细菌内的DNA分子结合起来．经过这样处理的细菌仍能分裂繁殖．请根据上述资料回答：

（1）人工诱变在生产实践中已得到广泛应用，因为它能提高 ______ 。

（2）酯酶的化学本质是________，基因控制酯酶合成要经过 ______ 和 ______ 两个过程． 

（3）通过生物工程产生的细菌，同样能合成酯酶，这是由于所有生物共用一套_____。

（4）请你具体说出一项上述科研成果的实际应用 ______ ．

利用遗传变异的原理培育作物新品种在农业中广泛应用．如图表示水稻育种的一些方法．请据图分析回答：

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

(1)在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是_______，②过程常用的方法是______。要检测受精卵染色体上是否插入了目的基因可采用_________技术。

(2)转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有____________。

(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是________细胞，Ⅲ代表的细胞具有_____________的特点。

(4)若prG位于无限增殖细胞的细胞质中，有人提出用核移植的技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用图示过程及文字表示该过程。

(5)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是______________，⑤过程常用的激素是____________，采用的技术是___________。愈伤组织的特点是_____________________________________________________。

(6)下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

①从基因组文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③构建cDNA文库④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因

A．①② B．②③ C．①③ D．①④

将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示 。

（1）过程①需用同种______________酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（2）过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让____________________进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是___________________。

（3） 部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是________________________________ 。

（4）检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是_____________________________________。 

下图表示小麦的三个品系的部分染色体及基因组成：Ⅰ、Ⅱ表示染色体，D为矮秆基因，T为抗白粉病基因，R为抗矮黄病基因，均为显性，d为高秆基因。乙品系是通过基因工程获得的品系，丙品系由普通小麦与近缘种偃麦草杂交后，经多代选育而来(图中黑色部分是来自偃麦草的染色体片段)。

(1)普通小麦为六倍体，染色体数是42条，若每个染色体组包含的染色体数相同，则小麦的一个染色体组含有________条染色体。

(2)乙品系的变异类型是____________，丙品系的变异类型是___________。

(3)抗白粉病基因在控制蛋白质合成的翻译阶段，________沿着________移动，氨基酸相继地加到延伸中的肽链上。

(4)甲和丙杂交得到F₁，若减数分裂中Ⅰ_甲与Ⅰ_丙差异较大不能正常配对，将随机移向细胞的任何一极，F₁产生的配子中DdR占________(用分数表示)。

(5)甲和乙杂交，得到的F₁中矮秆抗白粉病植株再与丙杂交，后代基因型有_______种(只考虑图中的有关基因)。

(6)甲和乙杂交得到F₁,请在画出F₁能产生dT配子的次级精母细胞的分裂后期图(假设不发生交叉互换,只需画出Ⅰ、Ⅱ染色体，要求标出相应基因)。