pET表达系统是原核蛋白表达引用最多的系统,其自身基础表达水平很低,并能实现目的基因的高效表达。pET载体上的目的基因被转移到大肠杆菌后,大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合,需通过T7RNA聚合酶间接调控。另外IPTG(乳糖类似物)可实现图1功能外,还可以使lac抑制子失活,激活lac启动子。请结合图示分析回答下列问题:

图1　　　图2图3

(1) 大肠杆菌时刻感知培养基的营养信息并传递到细胞内启动相应的应答机制,据图1分析,不含乳糖的条件下结构基因Z将____。 

(2) Z基因广泛用于基因表达调控的研究,当目的基因插入Z基因,用蓝白斑来筛选工程菌非常方便。X-gal(某种指示剂,无色)是β-半乳糖苷酶的底物,水解后呈蓝色,据此原理,应从图2的____菌落中挑选工程菌。 

(3) pET表达载体在构建时用限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ同时切割,与单用限制酶EcoRⅠ相比,采用EcoRⅠ和SmaⅠ双酶切的优点能减少质粒自身环化的概率,并__________。 

(4) 根据图3信息,大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合,说明酶具有____。从图中可看出,____基因能够抑制自身基因的基础表达水平,而____可将更多的细胞资源用于目的基因表达,因此可以____以控制靶基因的过度表达。 

A．卡那霉素和亮氨酸均含的培养基

B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培养基

C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基

D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培养基

（6）对杂种植株进行 ________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

分析有关遗传病的资料，回答问题。

由苯丙氨酸羟化酶基因突变引起的苯丙氨酸代谢障碍，是一种严重的单基因遗传病，称为苯丙酮尿症(PKU)，正常人群中每70人有1人是该致病基因的携带者(显、隐性基因分别用A、a表示)。图1是某患者的家族系谱图，其中Ⅱ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3及胎儿Ⅲ-1(羊水细胞)的DNA经限制酶Msp酶切，产生不同的片段(kb表示千碱基对)，经电泳后结果见图2。

请回答下列问题：

（1）Ⅰ-1、Ⅱ-1的基因型分别为________、________。

（2）依据电泳结果,胎儿Ⅲ-1的基因型是________。Ⅲ-1长大后，若与正常异性婚配，生一个正常孩子的概率为________。

（3）为了调查PKU发病率及其遗传方式，调查方法可分别选择为________(多选题)。

A.在人群中随机抽样调查     B.在患者家系中调查

C.在女性中随机抽样调查         D.对同卵和异卵双胞胎进行分析对比

（4）已知人类红绿色盲症是X染色体隐性遗传病(致病基因用b表示)，Ⅱ-2和Ⅱ-3色觉正常，Ⅲ-1是红绿色盲患者，则Ⅲ-1两对基因的基因型是________。

(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

疾病的诊断与治疗过程中，经常使用单克隆抗体。回答问题：

(1)单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，杂交瘤细胞具有的特点是________。体外培养杂交瘤细胞，首先应保证其处于________的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度，培养箱中充入二氧化碳的作用是________。

(2)单克隆抗体在诊断疾病的方面上具有________的优点；在治疗癌症方面可制成________治疗癌症。

(3)科研工作者欲对单克隆抗体进行改造，生产出效果更好的嵌合抗体，用于治疗疾病。用蛋白质工程技术对单克隆抗体进行改造时，首先必须根据预期________，设计嵌合抗体的结构。最终通过基因拼接，将抗体基因改造成嵌合抗体基因，然后导入到淋巴细胞中表达。检测该基因在淋巴细胞中是否翻译成蛋白质．可使用________技术。