图1

 图2

 图3

 　图4

(1) 观察根的切片：实验中用同一个显微镜观察了同一装片四次，每次仅调整目镜或物镜、细准焦螺旋，结果如图2所示，其中视野最暗的是________(填图中序号)。

(2) 观察洋葱根尖分生区细胞：该部分细胞一般呈________形。图3中A、B时期的最主要的区别是________。

(3) 利用洋葱管状叶分离叶绿体中的色素：实验中从叶片中提取色素，层析法分离后得到4条色素带(如图4)。如果在色素提取过程中，没有加碳酸钙，则无显著变化的色素带为________(填图中序号)。

(4) 若利用洋葱观察质壁分离及复原的现象，理想的实验材料为________，本试验中经常使用的实验试剂有________。

我国科学家屠呦呦因青蒿素的研究荣获2015年诺贝尔生理学和医学奖。青蒿素是目前世界上最有效的治疗疟疾药物，为青蒿植株的代谢产物，其化学本质是一种萜类化合物，但是青蒿中青蒿素的含量很低，且受地域性种植影响较大。其生物合成途径如图1实线框内所示，研究人员还发现酵母细胞也能够产生青蒿素合成的中间产物FPP（如图1虚线框内所示）。科学家为了提高青蒿素产量，将棉花中的FPP合成酶基因导入了青蒿植株并让其成功表达，获得了高产青蒿植株，过程如图2所示。

（1）研究人员从棉花基因文库中获取FPP合成酶基因后，可以采用________技术对该目的基因进行大量扩增。该技术除了需要提供模板和游离的脱氧核苷酸外，还需要提供________、________等条件。在基因工程中通常选择细菌质粒作为运载体，原因之一是________；如果某质粒由1000个核苷酸组成，核苷酸平均分子量为a，则该质粒的分子量为________。

（2）图2中的①为________，形成过程中需要________等酶。

（3）若②不能在含有抗生素Kan的培养基上生存，则原因是________。

（4）由题意可知，除了通过提高FPP的含量来提高青蒿素的产量外，还可以通过哪些途径来提高青蒿细胞中青蒿素的产量？（试举一例）︰_______________________________________。

（5）科研人员欲利用酵母细胞生产青蒿素，则在设计培育能生产青蒿素的酵母细胞过程中，需要向酵母细胞中导入________等基因。

（6）利用酵母细胞生产青蒿素与从植物体内直接提取相比较，明显的优势有________（写出2条）等。

（7）科研人员培育转基因青蒿植株时，构建基因表达载体的过程如图3。请分析若将图3①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。假设图中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？________，请说明理由__________________________________________。

苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图，据图回答下列问题。

（1）将图（一）①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。过程②需要用到________酶。

（2）假设图（一）中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图（一）中①的DNA右侧还能选择BamⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？________，请说明理由_____________________________________________________________________________。

（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒_____________________________。

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

（4）图中③的Ti质粒能调控合成一种蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中________对T—DNA的降解。

（5）已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞______________________________________________________________。

（6）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的________________________________基因频率的增长速率。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，影响植物正常生长，最终导致植物死亡。目前，发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过转基因处理，但是否成功未知。图l为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。据图回答︰

（1）若A、B、C浇清水，D、E、F浇含有草甘膦的水，则A～F植物中，一定能正常生长的是________。

（2）一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外，还应包括________。若利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是________和________。

（3）通常用_________法将EPSPS基因导入植物体内。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F没有表现出抗性，分析可能的原因________。

（4）图甲是某目的基因（4.0kb，1kb＝1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）。

①图乙培养基中含有氨苄青霉素，则培养基中出现的________（白色／蓝色）菌落中会含有重组质粒。

②现用EcoRI酶切重组成功的质粒（重组质粒上目的基因的插入位点与ECORI的识别位点之间的碱基对忽略不计），酶切后进行电泳观察，会出现K度为________kb的片段。

油菜由白菜（2n＝AA＝20）和甘蓝（2n＝cc＝18）天然杂交进化而来，如何在短时间内提高油菜籽的产油率、改善菜籽油的品质是科学家研究的热门课题。请分析回答下列问题︰

（1）在利用植物体细胞杂交技术将白菜和甘蓝体细胞融合前，需用________除去各自的细胞壁，常用化学促融剂________促进二者融合成杂种植物纽胞。在由杂种植物细胞生成再生植株的过程中，细胞内最多含有________个染色体组。

（2）研究发现，油脂的生成量与蛋白质的，生成量呈反相关，主要控制基因（独立遗传）及代谢路径如图。

①叶肉细胞中的丙酮酸主要来自________。

②高油油菜的基因型为________。基因型为MmNn的油菜自交，后代中宜于留种的纯合高油油菜占________。

（3）油酸为不饱和脂肪酸，能降低人体血液中胆固醇、减少患心血管病风险。F基因控制合成的油酸脂氢酶催化油酸形成饱和脂肪酸，转反义F基因油菜能提高菜籽油中油酸含量。

①利用油菜细胞的染色体DNA直接获取大量F基因的方法为________。

②构建反义F基因表达载体时，需要________酶；将反义F基因表达载体导入油菜根细胞的方法除基因枪法外，还可用________。从下图看出，构建反义F基因表达载体时没有设计标记基因，目的是________。

③Le启动子为种子特异性启动子，将F基因反向连接在Le启动子之后构建了反义F基因。检测转反义F基因油菜细胞内F基因转录的mRNA的含量，结果表明，因杂交形成双链RNA，细胞内F基因的mRNA水平下降。由此推测，反义F基因的转录抑制了F基因的________（填“复制”、“转录”，“翻译”）过程。若F基因转录时，两条单链（a₁、a₂）中a₁为转录的模板链，推测反义F基因转录时的模板链为________。