【生物——选修1：生物技术实践】

从自然菌样中筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适宜的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。筛选噬盐菌的菌样应从____________环境中采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_____________的培养基，并在__________条件下培养。

(3)如图甲、乙是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。

获得图甲效果的接种方法是________________，获得图乙效果的接种方法______________。

(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行____________，培养基的灭菌方法是________________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在____________条件下进行。

1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而开展了一个探究实验，实验过程包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数等。请回答下列问题：

（1）制备培养基时，配方一般都含有水、碳源、氮源和________。

（2）接种环在接种前必须________灭菌，然后待其冷却后在进行接种，冷却的目的是________。

（3）用稀释涂布平板法计数细菌个数时，为使估计值更接近实际值，应保持待测样品稀释度足够高，原因是________。

（4）将1mL水样稀释100倍后在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为46、40、37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。统计的菌落数往往比活菌的实际数目________。

（5）可通过观察平板上菌落的特征，如________（写两个），来判断湖水样品中细菌的种类。

（6）为了使实验结果可靠，应同时在另一灭菌的空白平板上接种________作为对照组.

[生物—选修1：生物技术实践]

大肠杆菌是人和动物肠道中普遍存在的一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO₂等气体。某研究机构使用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。请回答：

（1）研究人员向牛肉膏蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化为________，并且在倒置的小管中出现________。

（2）测定大肠杆菌活菌数目时，需制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基中为细菌提供氮源的物质是________。为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入________作为指示剂。

（3）为了便于统计污染严重的水体中活菌的数目，需将水样进行适当稀释，例如取水样2mL加入无菌水________mL制备稀释倍数为10¹的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。每个稀释倍数的菌液取10mL进行过滤，然后将滤膜放置在培养基上。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和放置滤膜等操作都应该在________进行。

（4）如果经过培养后稀释倍数为10²的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大肠杆菌________个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少，这是因为________。

生物技术实践与人们生产和生活密切相关。请回答下列有关问题：

(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌污染。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________灭菌和________灭菌。某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的同体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。进行微生物的计数时，运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是________。

(2)提取天然胡萝卜素的方法主要有三种，一是从植物中提取，二是从养殖的岩藻中获得，三是________。工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，________(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。

(3)胡萝卜素是________(填“挥发性”或“非挥发性”)物质。乙醚、四氯化碳和石油醚三种有机溶剂中，应选择石油醚来提取胡萝卜素，不选择乙醚的理由是________；不选择四氯化碳的理由是________。

生产实践中应用的菌种主要来土壤,从土壤中分离微生物的一般实验流程是：土壤収样—选择培养—梯度稀释—鉴別培养。请回答：

（1）欲从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在      环境中采集土样，所选择的培养基应以       作为唯一碳源。

（2）Taq耐热菌的发现和分离为基因工程的发展作出了突出贡献。分离Taq耐热菌所需要的特殊培养条件是             ，在生物休内进行DNA复制所必需而PCR技术中不需要的酶是             。

（3）下图是纯化微生物培养的效果图。请冋答：

①先配制好的培养基在接种前都要进行             灭菌，在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在            条件下进行。

②获得图A效果的接种方法是            ,获得图B效果的接种方法是            。

  （1）接种前要对培养基进行____________处理。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在____________条件下进行。

  （2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。如培养纤维素分解菌的菌样应从___________环境中采集。

  （3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制          培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为             。

  （4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是            ，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_____________来筛选纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____________________。

  （5）下图是利用        法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

  （6）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是         。

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B.划线操作须在火焰上进行

C.在5区域中才可以提取到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

 26．2（共15分）下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题。

（7）对于菊花来说，其组织或细胞在      条件下可以发育成完整的植株。在选取菊花茎段时要取       的嫩枝来进行组织培养。对月季来说，适宜花粉培养的时期是花粉应处于        期，为确定该花粉是否处于该时期，最常用的方法是              。

   （8）在培养菊花嫩枝组织和月季花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有             ；在材料消毒时都要先用体积分数为           浸泡，后用质量分数为0.1%的          消毒。

     （9）月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植株产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过       阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于             。

     （10）不同植物对各种条件的要求往往不同，进行菊花组织培养一般将温度控制在   ℃，并且对光照的控制为          。

   【选修Ⅲ  现代生物科技专题】(两道大题，选做选修Ⅰ不做此部分)

（1）研究中，首先要配制培养基，培养基中一般应含有                 等四类营养物质，配制好之后，应该用        灭菌法进行灭菌。

（2）操作A的目的是        ，操作B的接种法培养出的结果应该如图         所示。

（3）为了检测水样中的细菌，在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是                   ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为         个。

 （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。其原因是振荡培养能                   。