限制酶1：——↓GATC——；                限制酶2：——CCGC↓GG——；

限制酶3：——G↓GATCC——

⑴主要步骤：

①制备两种培养基：一种是＿＿＿＿培养基，另一种＿＿＿＿＿的培养基。分别分成两份，依次标上A，A^／的B，B^／，备用。

②分别向A、B培养基中接种＿＿＿＿＿＿。

③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。

④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A^／、B^／培养基中。

⑤接种后，把A^／、B^／培养基放入恒温箱中培养3～4天。

⑵回答问题：

在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

第④⑤两个步骤的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是                                                         。

     此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________           ________________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

请回答：

（1）图中重组细胞的细胞核来自            细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和             胚最终发育为克隆猪。

（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。

①图中X表示                 过程。

②从基因组数据库中查询Bcl-2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成                用于PCR扩增，PCR扩增过程第一轮循环的模板是                    。

(1)PCR技术已经走入人们的生活，例如亲子鉴定、刑侦破案等都用到。PCR技术的基础知识是DNA复制，辨认细胞内DNA复制的示意图，请指出1、2、3、4代表的物质：

    1.______________2._______________

    3.______________4._______________

(2) 比较PCR技术和DNA复制过程， 完成表格：

2,4-D作为除草剂在农田中大量使用,研究认为它是某种淋巴癌的致病因子。为降低2,4-D的危害,科研人员通过

基因工程技术构建了能高效降解2,4-D的基因工程菌。请回答:

(1)在农业生产上常会使用_______________浓度2,4-D进行麦田除草,在杀死杂草的同时却不会对小麦生长造成损害,原因是__________________________________________。

(2)从被2,4-D污染的土壤中得到能降解2,4-D的细菌,从该菌提取RNA,据此可建立_                     __                                      文库。

(3)PCR技术扩增目的基因的过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在_______________酶作用下进行延伸,如此重复循环多次,使目的基因的量呈_______________形式扩增。PCR技术扩增目的基因的前提是_                。

(4)一个基因表达载体的组成中要有标记基因,标记基因的作用是鉴别受体细胞中_______。欲知基因工程成功与否,需要进行分子水平的检测,有时还需进行_                。