抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：

（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是________________。

（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取目的基因。以此DNA为模板进行PCR扩增，还需要____________、____________、____________等。

②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用______________作限制酶。

③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：________________________。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是______________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，用该双链cDNA进行PCR扩增，进行了30个循环后，理论上可以产生约为__________个DNA分子，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的___________________，获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列___________（填“相同”或“不同”）。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_________________识别结合的位点。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有________和________，构建重组质粒时需要的工具酶有________，对获取的目的基因可用________技术对其扩增。

（2）实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了________；若大肠杆菌菌落显白色，说明导入了________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

（3）将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb＝1000个碱基对）。

[生物——选修3现代生物科技专题]

自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。

（1）      图中过程①②③④是获得孤雌克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程     （填序号）。

（2）孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺少          方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，但给研究者提供了很好的材料。

（3）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞        ，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（4）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择            时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出                    。

（5）早期胚胎移植时，必需移植到同种              的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（6）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过        方法得到多种cDNA，并通过              技术扩增产物。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

【生物——选修3：现代生物技术专题】

下图是利用基因工程培育抗虫棉的过程：

请回答下列相关问题：

（1）获得的Bt毒蛋白基因可通过PCR技术扩增，扩增Bt毒蛋白基因需要的成分包括DNA母链、________、DNA聚合酶以及引物，加入的DNA聚合酶应具有________的特点，加入引物的作用是________。PCR一般要经过三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和________三步。

（2）过程①表示________，过程③表示________。确定抗虫棉植株具有抗虫特性的方法是________。

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____________合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。

(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_____________（填写字母，单选）。

A.人血细胞启动子  B.水稻胚乳细胞启动子 C.大肠杆菌启动子 D.农杆菌启动子

(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是__________________________。

(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才有活性。与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是_______________________________________。

(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_________________的生物学功能一致。

(1)PCR技术已经走入人们的生活，例如亲子鉴定、刑侦破案等都用到。PCR技术的基础知识是DNA复制，辨认细胞内DNA复制的示意图，请指出1、2、3、4代表的物质：

    1.______________2._______________

    3.______________4._______________

(2) 比较PCR技术和DNA复制过程， 完成表格：

2,4-D作为除草剂在农田中大量使用,研究认为它是某种淋巴癌的致病因子。为降低2,4-D的危害,科研人员通过

基因工程技术构建了能高效降解2,4-D的基因工程菌。请回答:

(1)在农业生产上常会使用_______________浓度2,4-D进行麦田除草,在杀死杂草的同时却不会对小麦生长造成损害,原因是__________________________________________。

(2)从被2,4-D污染的土壤中得到能降解2,4-D的细菌,从该菌提取RNA,据此可建立_                     __                                      文库。

(3)PCR技术扩增目的基因的过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在_______________酶作用下进行延伸,如此重复循环多次,使目的基因的量呈_______________形式扩增。PCR技术扩增目的基因的前提是_                。

(4)一个基因表达载体的组成中要有标记基因,标记基因的作用是鉴别受体细胞中_______。欲知基因工程成功与否,需要进行分子水平的检测,有时还需进行_                。