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            • 1. 基因工程自20世纪70年代兴起后,发展迅猛,成果显著。
              Ⅰ利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是          。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用   处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了 mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与 mRNA杂交,该杂交技术称为        。为了检测胰岛素基因转录的 mRNA是否翻译成蛋白质,常用_______________技术。
              Ⅱ近10年来,PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规手段,下图为PCR原理示意图,据图回答问题。
              (1)基因工程中,利用PCR技术来__________,PCR技术依据的原理是DNA的半保留复制,生物体内也能完成DNA的复制,但有所不同,图中A过程称为____________,在生物体内需要___________才能完成。图中B过程的完成需要_____________________________等条件。
              (2)若DNA样品的长度为100个碱基对,且A占15%,则完成三次循环,共需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸___________个。
            • 2. (每空1分,共9分)下图是月季离体培养产生花粉植株的两种途径。请据图回答有关问题

              (1)选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素,一般来说选用          期的花粉可提高成功率。培育花粉植株的两条途径之间并没有绝对的界限,主要取决于        _         _。不管哪种途径,最终获得完整植株后须对其进行             ,才能使其结实产生后代。

              (2)剥离花药时,要尽量不损伤花药,否则接种后容易从受损部位长出              ,形成的花粉植株          数目会发生变化,所以需对培养出的植株作进二步的鉴定和筛选。

              (3)过程②中脱分化和再分化所用培养基有差异,主要是              的差异。通过②过程产生的细胞与枝条韧皮部细胞形态结构      (相同/不同),其根本原因是              

              (4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素,请说明下列各项中需要灭菌的有           (填编号)。

              ①  养基 ②培养皿 ③接种环  ④花蕾 ⑤实验操作者的双手  ⑥三角锥形瓶

            • 3.

              重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变(如图)。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物(如图的引物b和引物c),然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得到的两个PCR产物分别带有变异碱基,并且彼此重叠,在重叠部位经重组PCR就能得到诱变的PCR产物(如图的突变产物AD)。请回答下列问题:

                

              (1)PCR与体内DNA复制相比,不需要                酶参与。

              (2)引物中(G+C)的含量越高,引物与模板DNA结合的稳定性                   

              (3)图中获得产物AB和CD,必须将引物a、引物b和引物c、引物d置于不同反应系统中,这是因为                   。除图中所示外,在不同的反应体系中需要共同加入的物质是                 。 

              (4)在引物a、引物b组成的反应系统和引物c、引物d组成的系统中均进行一次复制,共产生                 种双链DNA分子。

              (5)图中获得产物AB,至少要经过                    轮循环,循环产物中含有引物a的DNA占有的比例为                         

            • 4. 27、花椰菜易受黑腐病菌的危害而害黑腐病,野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化,并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合,以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。


              据图回答下列问题:

              (1)过程①所需的酶是           。过程②中PEG还可以用               等物理方法替代,全部过程用到的生物技术的原理是                        

              (2)过程②后,在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的                存在,这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。原生质体经过            再生,进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

              (3)若分析再生植株的染色体变异类型,应剪取再生植株和                 植株的根尖,通过解离、漂洗、染色和制片等过程制成装片,然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

              (4)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增,得到两亲本的差异性条带,可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断,再生植株1—4中一定是杂种植株的有              。

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