科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____________合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。

(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_____________（填写字母，单选）。

A.人血细胞启动子  B.水稻胚乳细胞启动子 C.大肠杆菌启动子 D.农杆菌启动子

(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是__________________________。

(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才有活性。与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是_______________________________________。

(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_________________的生物学功能一致。

基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）限制酶能识别双链DNA分子的________并切割，形成黏性末端或________；它存在于原核生物中的主要作用是________。

（2）从基因组文库获取目的基因的数目比从cDNA文库中获取的要多，原因是________。

（3）PCR技术可扩增目的基因，运用的原理是________，其参与的组分有DNA模板、4种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、分别与两条模板相结合的两种________。

（4）基因表达载体中的标记基因的作用是________。

（5）蛋白质工程之所以称为后基因工程，是因为要实现对新蛋白质的设计改造，必须要通过________或基因合成来实现。

(1)步骤①核移植前为获得更多的卵母细胞，采用________处理使其超数排卵，从输卵管中冲出的卵子处于________时期，去除卵母细胞的________(结构)。

(2)培养细胞过程中，要置于CO₂培养箱中，其中CO₂的主要作用是________。

(3)图中ES细胞来自________时期的________细胞。步骤③中需要先利用PCR技术扩增正常基因片段，可以根据正常基因的________设计引物，PCR技术中使用的酶为________。为检测目的基因是否表达，采用的方法为________。

在基因工程中，为了获得目的基因，一般有三种方法：

(1)通过        获得目的基因。这一方法是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，分别导入受体菌中，储存起来而获得的。

(2)           技术。这一方法模仿了DNA复制原理，根据已知目的基因的脱氧核苷酸序列，合成一对含大约20个碱基的引物，引物本身确定了从DNA的哪个位置开始复制，这样，就可以利用含目的基因的DNA长链，复制出大量的目的基因（短链）出来。在复制时，需要周期性地调节反应系统的温度，在大约90-95⁰C时，DNA双链       (互补结合或解旋分离)，这一步        (需要或不需要)解旋酶；降温后，引物与单链DNA的特定序列结合，以         为原料，合成子链，从5^，端到3^，端延伸，延伸的过程中，需要            (填某物质)，此物质能耐95⁰C的高温而不被破坏。

(3)             方法。此方法一般用于基因较小，且核苷酸序列已知的情况下。

（1）短时间内大量扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因经常采用                 技术。过程①是将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵，该过程常用的方法是                 。            

（2）过程②包括             技术和               技术；为获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊，在过程②还可使用          技术。

（3）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用              技术。

（4）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被成功导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端的          和末端的          没有设计好，应从这方面进一步改善。

2,4-D作为除草剂在农田中大量使用,研究认为它是某种淋巴癌的致病因子。为降低2,4-D的危害,科研人员通过

基因工程技术构建了能高效降解2,4-D的基因工程菌。请回答:

(1)在农业生产上常会使用_______________浓度2,4-D进行麦田除草,在杀死杂草的同时却不会对小麦生长造成损害,原因是__________________________________________。

(2)从被2,4-D污染的土壤中得到能降解2,4-D的细菌,从该菌提取RNA,据此可建立_                     __                                      文库。

(3)PCR技术扩增目的基因的过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在_______________酶作用下进行延伸,如此重复循环多次,使目的基因的量呈_______________形式扩增。PCR技术扩增目的基因的前提是_                。

(4)一个基因表达载体的组成中要有标记基因,标记基因的作用是鉴别受体细胞中_______。欲知基因工程成功与否,需要进行分子水平的检测,有时还需进行_                。

(1)与PCR相比，过程①需要的特有的酶是________，应从人体________(器官)的组织细胞中获得模板RNA。

(2)DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是________。过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是________。

(3)过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用________(技术)分离、筛选重组表达载体。

(4)显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光。根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是________。

(5)研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强。这一实验结果可以说明________。

①重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体

②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工

③限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列

④只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达

⑤所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物身上

⑦质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体．