屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列________(填“相同”或“不同”）。在提取RNA时需要向提取液中添加RNA酶抑制剂，其目的是_________。

（2）将获得的突变基因导人普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用Sma Ⅰ切割，原因是_________。构建重组质粒时在其目的基因前需要添加特定的启动子，启动子的作用是_______________。

（3）基因表达载体导入组织细胞后，要通过植物组织培养技术培育出青蒿幼苗，该技术的关键步骤是____________。鉴定该基因工程是否成功还要进行___________实验，但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察，其原因是_________。

回答下列（一）、（二）小题：

(一)转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

（1）若要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会________________________。要获得含抗病基因的重组质粒可用___________和_____限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有_________________基因，作为标记基因。

（3）将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是_______________法。

（4）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________的方法，可培育成能表现新性状的植株，该方法依据的原理是：_______________________________。

(二)图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

（1）构建含有LYZ-GFP基因的重组质粒时，应选用限制酶_______进行切割，原因是_____________________________________。

（2）据图分析，在培育转基因苜蓿植株过程中，应选择LYZ-GFP基因中的GFP基因为标记基因，而不选择质粒中原有的卡那霉素抗性基因为标记基因，这种做法的优点是______________________________。

（3）在组织培养过程中，对愈伤组织进行显微检测，若______________________ ，则表明细胞中GFP基因存在并表达。

（4）选择含有GFP基因的愈伤组织为材料，用PCR技术扩增并检测LYZ基因，需选用一段_________________________合成引物，该过程所用到的酶必须具有_______的特性。

（5）对该苜蓿植株进行病菌接种实验，通过观察其抗病程度可以进行个体生物学水平的鉴定，原因是 ____________________________。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：

(1)分析上图可知，构建重组质粒(如图所示)最好选用________限制酶，理由是________________________________________________。

(2)工业生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的具体处理方法是________________________。现在生产凝乳酶多采用酵母菌，酵母菌作为受体细胞的优势是______________________。

(3)研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是________________，该生物工程技术的原理是________________________，实质是________________。

（4）基因工程的最后一步中，目的基因能否在生物体内稳定遗传的关键是_______________________________________________，方法是          。检测目的基因是否转录出了mRNA 所用的探针是用什么制作的_____________________（A DNA    B RNA   C 蛋白质）

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：

（1）分析上图可知，构建重组质粒(如图所示)最好选用                    限制酶，理由是________________________________________________。

（2）工业生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现在生产凝乳酶多采用酵母菌，酵母菌作为受体细胞的优势是______________________。

（3）研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是________________。

（4）基因工程的最后一步中，目的基因能否在生物体内稳定遗传的关键是_____________________________________________________________。

（1）过程①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为_____________,这种酶主要有两类，一类是从T4噬菌体中分离得到的，另一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为_______________。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的____________________键。
（2）图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为__________________，除此外还可以利用的方法有________________________。对过程②操作前，需先用Ca²⁺处理农杆菌，使其成为___________细胞。
（3）检测转基因苦荞培育是否成功，不能用抗原﹣抗体杂交技术进行检测的原因是_______________________________________，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的_______________含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。

应用基因工程技术可获得人们需要的生物新品种或新产品。根据资料和图解回答下列问题：

资料1：蜘蛛丝(丝蛋白)被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度。科学家研究出集中生产蜘蛛丝的方法——培育转基因蜘蛛羊。资料2：将疫苗藏身水果蔬菜中，人们在食用这些转基因植物的同时也获得免疫力，因而无需免疫接种，这一新概念将引起疫苗研究的一场革命。

（1）过程①⑤所需要的工具酶有_____________，构建的蜘蛛丝蛋白基因表达载体一般由目的基因、_______ 、启动子、________等部分组成。

⑵过程②将重组质粒导入山羊受体细胞时，采用最多也最有效的方法是___________。通过①～④过程培育的蜘蛛羊可以作为乳腺生物反应器，从__________中提取所需要的蜘蛛丝蛋白。

⑶如果将过程③获得的早期胚胎进行如图分割，则操作正确的是______________。

A.

B.

C.

D.

⑷通过⑤⑥⑦培育转基因莴苣，相比诱变育种和杂交育种方法，具有____和_____等突出优点。

（1）与酵母菌相比较，蓝细菌在结构上最主要的特点是没有成型的__________，在代谢上最主要的特点是能进行__________作用。

（2）①②过程中均使用的工具酶有__________和__________。

（3）构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是__________和__________。

Ⅱ．人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请回答下列问题。

（4）制备单克隆抗体过程中要用到__________技术和__________技术。

（5）在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。

①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的__________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。

②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是__________。

（6）此过程生产的单克隆抗体可以与__________特异性结合，从而诊断早孕。