下列关于生物工程相关知识的叙述，正确的项数是

①植物组织培养过程中愈伤组织的代谢类型是自养需氧型

②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，在聚乙二醇的诱导下，发生融合的细胞即为杂交瘤细胞

③若要生产转基因抗病棉花，可将目的基因先导入到T-DNA上，让T-DNA感染棉花细胞，实现目的基因的导入

④用于基因治疗的基因可以是从健康人体细胞中分离得到的功能正常的基因，也可以是反义基因或者自杀基因

⑤在植物体细胞杂交中，可采用质壁分离实验检测制备的原生质体的活性情况

图1

(1) 过程②中常用____技术将目的基因导入受精卵,受精过程中精子头部接触卵细胞膜时产生____反应,以防止多精入卵。 

(2) 过程⑤在精核与卵核融合之前,用微型吸管吸除雄核,再用细胞松弛素B处理(作用类似于用秋水仙素处理植物细胞),处理后的受精卵可发育成猕猴。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是_________________。 

(3) ⑦过程通过____技术实现,在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是______________。 

(4) 胚胎工程中通常需要鉴定胚胎性别,如利用SRY—PCR技术鉴定,鉴定时需以Y染色体上的SRY基因(性别决定基因)的一段序列设计引物,用被测胚胎DNA作模板进行PCR扩增。根据SRY基因序列设计的引物长度一般为20~24个核苷酸,其不宜过短的原因主要是_。 

图2　　　　　　　　　　　　

农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

（1）为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是__________。

（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用限制性内切酶（限制酶）进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是（    ）

（3）切割完成后，采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_____。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_________棉花细胞，利用植物细胞具有的_________性进行组织培养，从培养出的植株中筛选（选择）出抗病的棉花。

（5）转基因棉花获得的_______________是由该表达产物来体现的。

（1）打靶载体中含有的目的基因是     ，需将该目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA片段都重组到质粒上，整合时用到的酶有      。

（2）图中的同源重组位点是指打靶载体和小鼠基因组DNA中具有     的DNA片段。

（3）将打靶载体线性化是选择的限制性核酸内切酶的识别序列不能位于    等中。线性化的打靶载体可采用    法导入小鼠细胞。将小鼠细胞培养在含     的培养液中，可以成功筛选出打靶成功的小鼠细胞，经细胞培养后可以获得大量的具有目的基因的细胞。

（4）可以通过动物细胞克隆技术获得含人胰岛素基因的小鼠，其过程是将打靶成功的小鼠细胞的细胞核移植到     中，培养到     期移植到代孕母鼠子宫内进行发育。

下列有关基因工程的叙述，错误的是（　　）

马铃薯块茎含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发。下图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答问题：

（1）为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的___来合成cDNA。

（2）上图构建基因表达载体时，最好选用________________酶切割含目的基因的外源DNA和质粒，不能使用Sma l切割的原因是___________。构建好的重组质粒在抗盐基因前要加上特殊的启动子，启动子是一段有特殊结构的_____________片段。

（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA上的原因是____________。通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以_______________。

（4）从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是_____________。

    ①目的基因与运载体相结合        ②将目的基因导入受体细胞

    ③检测目的基因的表达           ④提取目的基因

牛雄性胚胎中存在特异性的H-Y抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应器进行生物制药。回答有关问题，

（1）用H-Y抗原免疫母牛可获得相应抗体，但这种抗体的缺点是________________。

（2）利用细胞融合技术而发展起来的___________技术，为制造单克隆抗体开辟途径。常用于细胞融合的诱导因素有聚乙二醇（PEG）___________、电激等。

（3）将药用蛋白基因与___________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，然后使其生长发育成转基因动物。转基因动物通过分泌的乳汁来生产所需要的药品，称为乳腺生物反应器。

（4）通常选用囊胚期的早期胚胎做雌雄鉴别，鉴别后的__________胚胎可做胚胎移植。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______。

(2)在构建重组质粒时,应选用______ 和_____ 两种酶对______和______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(3)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。

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培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______ 、______。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的抗盐基因作探针进行______，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______技术，愈伤组织经细胞的增殖和分化，进而形成完整植株。