（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_________________________ 。

（3）在实验室应采用___________法对培养基进行灭菌处理，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_____________条件下进行．若发现在⑤中菌落过多，无法准确计数，可以将③中取出的菌液_____________________________ ．

Ｉ下图表示单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：

（1）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来得到，B淋巴细胞从小白鼠体内分离之前,应对小白鼠进行的处理是_________________ ,该处理的实质是在小白鼠体内发生_____________过程。骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较,遗传物质发生的主要变化是___________,从而违背了“程序性细胞死亡”规则,打破了细胞产生与细胞死亡的动态平衡。

（2）____________________技术是单克隆抗体技术的基础，根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__________培养基，试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的另一条途径________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备B淋巴胞的_______特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是_______________，_______________。                                            

II绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

（1）①过程需要限制酶切断________________键，使DNA分子断裂，其结果形成_____________。图中过程②常用的方法是_____________ ；过程③利用的生物技术主要是___________________；在进行过程④前，利用______________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上_____________。

（3）获取外源基因若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 _________ 技术．在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用______激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵．在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 __________ 处理．将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因生物进行_________________。

酵母菌是生物科学研究中一种重要的生物材料，如图示，请回答下列问题：

（1）在①中，酵母菌与醋酸菌结构上最主要的区别是：____________________________。

（2）在②③的实验中，如何测定酵母菌有氧呼吸无酒精产生，而进行无氧呼吸过程中有酒精产生，其反应式为：__________________________________________，若酒精的测定步骤如下，请补全．取3支干净的试管编上号A、B、C，在A、B两支试管中分别加入2mL有氧呼吸、无氧呼吸的发酵液，在C试管中加入____________做对照．在3支试管中分别滴加_______________________________并轻轻震荡，观察溶液是否变色。

（3）在④的实验中，如要连续7天测定恒定体积和浓度的培养液中酵母菌种群数量的变化，需要用7支试管来培养并持续分别测定的原因是_______________________________。

其中操作正确的有__________ （填下列操作的序号）。

A．将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的试管中，在适宜条件下培养

B．静置一段时间后，用吸管从试管中吸取培养液

C．在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片

D．用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液

E．将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，在显微镜下观察、计数

（4）在制作葡萄酒的过程中，假设某同学的某一步骤操作错误导致发酵瓶瓶塞被冲开，该错误操作是____________________________________。

图表示的是在最适温度、最适pH条件下，反应物浓度对酶所催化的化学反应速率的影响。回答下列问题：

（1）酶与无机催化剂相比催化效率更高，原因是                                               

                    。适当提高b组的反应物浓度，反应速率没有提高，其限制因素最可能是                                       。

（2）酶活性的大小可以用在一定条件下一定时间内产物的生物量来表示。为准确测量酶活性的大小，在进行实验时，反应物的初始浓度应设置为       （填“a”、“b”或“c”）较为合适，理由是                                                                            

                                                                                 。

【加试题】（一）蓝莓富含花青素，含有丰富的营养成分，是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，蓝莓的深加工产品也深受人们的喜爱，下图是某实验室利用蓝莓酒制作蓝莓醋的实验装置，回答以下问题：

（1）果醋发酵需要的菌种是__________，实验前需将该菌种在______上进行扩大培养。

（2）甲中是蓝莓酒和蒸馏水的混合物，其比例是_____

   A.1：2 B.1：4 C. 2：1 D.4：1

（3）乙中是经_________灭菌过的锯末，采用_________法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期，降低生产成本和提高生产效率，并增强果醋的风味。

（4）若该菌种在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是____________________。

（二）2014年7月，FDA批准了利用转基因兔生产的新药Rucones（重组人C1酯酶抑制剂），该药物可用于治疗成人及青少年遗传性血管性水肿患者的急性发作，其部分技术路线如图：

（1）由过程①得到的A为_____________ 。

（2）过程②常用的方法是______________。

________细胞作为饲养层细胞，用以___________________。

（4）兔的胚胎干细胞不能发育成完整个体，但可以通过___技术形成重组细胞，然后利用____技术，通过代孕母兔分娩出转基因兔，从转基因兔的乳汁中提取Rucones药物。

回答下列问题：

(1)组成纤维素酶的基本单位是________，其能够将纤维素分解成________，该产物可与________试剂在加热时生成砖红色沉淀。

(2)该实验中，为了控制实验温度，装有酶和底物的试管应置于________中以保持恒温；单位时间内________________________可以表示纤维素酶催化效率高低。

(3)由实验结果可知，在时间t₁之前，若乙组温度提高5℃，那么乙组酶催化反应的速度会________________________________。

(4)若在时间t₂时，向丙组反应体系中增加2倍量的底物，其他条件保持不变，那么在t₃时，丙组产物总量________，原因是______________________________________________________。