下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                  等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有      、          个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取       作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要        个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发       色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

Ⅰ.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点  的距离，单位为kb（1kb = 1000个碱基对长度）。请回答下列问题：

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

(1) 制作固定化酵母细胞时，使用了图甲中方法〔  〕________（填出标号及名称），在该实验中，完全溶化的海藻酸钠溶液必须________ 后再与酵母细胞混合。充分混合均匀的酵母菌—海藻酸钠胶液可在饱和________溶液中形成凝胶珠。

 (2) 图乙表示________的实验过程, 通过B所示步骤得到滤液后，再向滤液中加入2moL/L的NaCl溶液的目的是________,C所示步骤加入蒸馏水的目的是________。

农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

（1）为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是__________。

（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用限制性内切酶（限制酶）进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是（    ）

（3）切割完成后，采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_____。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_________棉花细胞，利用植物细胞具有的_________性进行组织培养，从培养出的植株中筛选（选择）出抗病的棉花。

（5）转基因棉花获得的_______________是由该表达产物来体现的。

（1）打靶载体中含有的目的基因是     ，需将该目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA片段都重组到质粒上，整合时用到的酶有      。

（2）图中的同源重组位点是指打靶载体和小鼠基因组DNA中具有     的DNA片段。

（3）将打靶载体线性化是选择的限制性核酸内切酶的识别序列不能位于    等中。线性化的打靶载体可采用    法导入小鼠细胞。将小鼠细胞培养在含     的培养液中，可以成功筛选出打靶成功的小鼠细胞，经细胞培养后可以获得大量的具有目的基因的细胞。

（4）可以通过动物细胞克隆技术获得含人胰岛素基因的小鼠，其过程是将打靶成功的小鼠细胞的细胞核移植到     中，培养到     期移植到代孕母鼠子宫内进行发育。

I.[生物一选修1:生物技术实践]

酵母菌是生物科学研穷中一种重要的生物材料，请回答：

（1）酵母菌的新陈代谢类型是__________，其细胞内将葡萄糖分解为酒精的酶存在于__________。

（2）某同学尝试用新鲜葡萄制作葡萄酒、为验证发酵液中含有酒精，取2mL发酵液加入试管中，滴加O.5mL浓硫酸酸化的重铬酸钾溶液并轻轻震荡，观察到溶液变__________色，则证明发酵液中含酒精。

（3）研究者利用基因工程技术改造酵母菌，得到如下四种变异菌株：①菌株Ⅰ——不能合成纤维素酶，菌株Ⅱ——合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，菌株Ⅲ——合成的纤维素酶能分泌到细胞外，菌株Ⅳ——合成的纤维素酶分泌并固定于细胞壁。

在以纤维素为唯一碳源的培莽基上能生长繁殖形成菌落的是菌株_______，若在培养基中加入_______，则菌落周围会出现透明圈。在利用纤维素生产酒精时，与菌株Ⅲ相比，菌株Ⅳ的纤维素酶的利用率高，因为______________________________________________________________。

（4）为研究发酵罐中酿酒酵母菌的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH值。若某研究人员将样品的次序搞乱了，那么判断取样顺序的主要依据基__________（填“酵母菌的数量”或“发酵液的pH”）。

II.[生物一选修3:现代生物科技专题]

内皮抑素是一种效果良好的新型抗癌药物，由胶原XⅤⅢ（广泛存在于肝脏等组织中）降解产生。我国科学家研制成含转入内皮抑素基因双歧杆菌的口服液，口服后，双歧杆菌在肠道定植、繁殖，双歧杆菌死亡裂解后，其产生的内皮抑素活性片段被吞噬、转运到肿瘤组织发挥作用。回答下列问题：

（1）要利用逆转录的方法合成人内皮抑素基因，应从__________组织细胞中提取mRNA，与细胞中内皮抑素基因相比，这种方法合成的cDNA没有__________、启动子、终止子等。

（2）根据内皮抑素基因的脱氧核苷酸序列设计并合成引物，利用__________技术得到大量内皮抑素基因。

（3）临床上也有通过静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，使肿瘤生长受到抑制。在进入临床使用前需要进行目的基因的检测与鉴定：用胰蛋白酶将血管内皮组织___________，制成细胞悬液→转入

含_____________________等天然成分的培养液中培养得到大量血管内皮细胞→用重组腺病毒感染血管内皮细胞，若抗原—抗体杂交检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明_________________。

（4）口服含转入内皮抑素基因双歧杆菌口服液、静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，两种方法都能使肿瘤生长受到抑制，其中属于体内基因治疗的是__________（填“第一种”或“第二种”）。

（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的       ，以其作为模板，在             的作用下合成           。获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。

（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是        。该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是           。

（3）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分        细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。

（4）人的免疫系统有        癌细胞的功能，艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。

牛雄性胚胎中存在特异性的H-Y抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应器进行生物制药。回答有关问题，

（1）用H-Y抗原免疫母牛可获得相应抗体，但这种抗体的缺点是________________。

（2）利用细胞融合技术而发展起来的___________技术，为制造单克隆抗体开辟途径。常用于细胞融合的诱导因素有聚乙二醇（PEG）___________、电激等。

（3）将药用蛋白基因与___________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，然后使其生长发育成转基因动物。转基因动物通过分泌的乳汁来生产所需要的药品，称为乳腺生物反应器。

（4）通常选用囊胚期的早期胚胎做雌雄鉴别，鉴别后的__________胚胎可做胚胎移植。