[生物——选修1：生物技术实践]

焚烧秸秆是导致雾霾的原因之一。下图是工业上利用秸秆中的纤维素发酵生产酒精的基本工艺流程：

回答下列问题：

（1）步骤①需要的微生物大多分布在       的环境中。②中获得的酶是一种复合酶，其中       能将纤维二糖分解成发酵所需的葡萄糖。

（2）为了获得酵母菌，可取土样将其稀释，用涂布器涂布到多个琼脂固体培养基的表面，这种方法称为       。下图所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是       。

用这种方法统计样本菌落数时，需要设置空白对照组，原因是       。

（3）步骤③要注意对接种器材进行       ；步骤④一般需将温度控制在       。

人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有                   、                    (至少答2种)。

(2)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于     培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的         使pH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力              。

(3)与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数           。

A．多        B．少      C．相等      D．几乎为零

(4)将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在              旁进行操作。接种后的培养皿            于37℃的                中培养。

请回答下列生物技术实践方面的问题：

（1）在果酒的制作中，在有氧条件下酵母菌进行有氧呼吸，进行________；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，产生________。在果醋的制作中，当________都充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸；当缺少________时，醋酸菌将乙醇→乙醛→醋酸。

（2）微生物接种的方法很多，最常用的是________和稀释涂布平板法，其操作方法各不相同，但核心都是要________，保证培养物的纯度。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行。

（3）DNA的粗提取实验中两次使用蒸馏水，但其目的不同。第一次的目的是使鸡血细胞吸水涨破；第二次的目的是________，使DNA逐渐析出。

[生物——选修1：生物技术实践专题]

乳酸菌是人和动物体胃肠道中的有益菌，能助消化，利于肠道健康，但是消化道中胆汁所含的胆盐会对乳酸菌的生理活动有抑制作用，为此，研究人员通过辐射处理野生型乳酸菌，得到耐高浓度胆盐的乳酸菌。

（1）与腐乳制作所用微生物相比，乳酸菌在结构上的主要特点是________。

（2）实验步骤：

①育种与培养：辐射处理后可得到多种类型的乳酸菌，置于经过________法灭菌处理的________（固体、液体）培养基中，37℃振荡培养。

②接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。之后，将菌液涂布接种于含0.3％胆盐和不含胆盐的固体培养基上，配制时为了使培养基凝固，应向培养基中加入________；置于37℃条件下________（密闭、充气）培养。不含胆盐的培养基培养的目的是________。

②筛选与纯化：从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用________法接种于新的培养基平板，可对菌株进一步的纯化。

【生物技术实践】苹果园广泛使用的一种除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，科学工作者按甲图程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，再稀释10³倍．各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为______。

（2）科学工作者为修复被该除草剂污染土壤的目的来选择细菌，所用培养基应该_______

_____________。

（3）接种技术的核心是_________________。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步_______________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是______________，据此可筛选出目的菌。实验结果如乙图显示的A～E五种菌株中，___________是最理想菌株。

[生物——选修1：生物技术实践]

分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株，并对筛选出的菌株进行了初步研究。

(1)对培养基进行灭菌的常用方法是        。为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用        法进行接种。

(2)先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以         为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入       溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量          。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知，8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强，你的解释是               。

 注:①DP = (D / d) 2，其中d表示菌落直径(cm)，D表示水解圈直径(cm)

      ②“+”为滤纸边缘膨胀；“+ +”为滤纸整齐膨胀并弯曲；“+ + +”为滤纸不定形；“+ + + +” 为成团糊状；“+ + + + +”为半清状 (3)为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见下图。

 由图分析可知，三种菌株对        的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中            的降解率变化最大。

【生物－选修1：生物技术实践】

现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免的产生了大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。下图是工业上利用微生物将纤维素

（1）上述工作流程中①环节需要的微生物大多分布在＿＿＿＿＿＿的环境中。在分离分解纤维素的微生物时，土壤取样后，通过选择培养可以＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，在筛选①环节需要的微生物时，可采用＿＿＿＿＿＿（方法），通过＿＿＿＿＿＿直接对微生物进行筛选。

（2）可利用＿＿＿＿＿＿技术，使②中的酶能够重复利用。

（3）生产中可以满足④环节的常见菌种是＿＿＿＿＿＿，④过程要注意对接种器材进行＿＿＿＿＿＿。为了确保⑤环节成功，后期要注意发酵装置＿＿＿＿＿＿。

  （1）接种前要对培养基进行____________处理。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在____________条件下进行。

  （2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。如培养纤维素分解菌的菌样应从___________环境中采集。

  （3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制          培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为             。

  （4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是            ，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_____________来筛选纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____________________。

  （5）下图是利用        法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

  （6）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是         。

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B.划线操作须在火焰上进行

C.在5区域中才可以提取到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

 26．2（共15分）下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题。

（7）对于菊花来说，其组织或细胞在      条件下可以发育成完整的植株。在选取菊花茎段时要取       的嫩枝来进行组织培养。对月季来说，适宜花粉培养的时期是花粉应处于        期，为确定该花粉是否处于该时期，最常用的方法是              。

   （8）在培养菊花嫩枝组织和月季花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有             ；在材料消毒时都要先用体积分数为           浸泡，后用质量分数为0.1%的          消毒。

     （9）月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植株产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过       阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于             。

     （10）不同植物对各种条件的要求往往不同，进行菊花组织培养一般将温度控制在   ℃，并且对光照的控制为          。

   【选修Ⅲ  现代生物科技专题】(两道大题，选做选修Ⅰ不做此部分)

     目前，现代生物技术已经广泛地应用于工业、农牧业、医药、环保等众多领域，产生了巨大的经济和社会效益。请回答下列生物技术方面的问题：

(1)利用乳酸菌制作泡菜时，往往会加入陈的“泡菜水”，作用是________，若泡菜特别咸而不酸，最可能的原因是_________________________。

(2)微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是________________________。

(3)柑橘组织培养的操作程序是①________；②________；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培。柑橘皮可以用提取橘皮精油，橘皮在________中的浸泡时间为10h以上，并且橘皮要浸透，这样才会得到高的出油率。

(4)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、蒸馏法和_____。

(1)江南某橘子盛产地想建立一个大型的果酒、果醋加工厂，需要的发酵菌种是_________和________。分离纯化这两种微生物的常用方法是：将10³-10⁷倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平。这种接种方法称为_________________  。

(2)提取桔皮的胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是________________________________________________________________________。

(3)四川一果汁加工厂在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的________________使果汁变得澄清。

(4)培养外植体的培养基中常用的凝固剂是________________。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值____________(填“高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是______________________________________________。