螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

→→→→

请回答：

(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。

(2)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。

(3)在培养时，需将培养皿倒置并放在__________________中。若不倒置培养，将导致无法形成单菌落。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的____________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

某生物兴趣小组通过测定土壤中的微生物的种类、含量等来了解其土质情况，并做了相关微生物的分离工作。回答相关问题。

⑴获得纯净培养物的关键是___________________________，这是研究和应用微生物的前提。

⑵从土壤中分离纤维素分解菌时，常从公园里、街道旁、花盆中的土壤或是农田、菜园土选取土壤时，原因是___________________________。

⑶该小组对某种菌进行扩大培养时等分为两组，A组静置培养，B组振荡培养。结果发现B组比A组的细菌要多得多，原因是_______________________________（答两点）。

⑷小组进一步发现，该土壤中只有一种真菌，欲使其从土壤中与其它细菌分离开，可在牛肉膏-蛋白胨培养液中加入___________。分离纯化后提取DNA测序发现含有产脲酶的基

因序列，请设计实验证明该种真菌可合成脲酶（简要说明实验步骤，结果，结论。相关试剂、仪器、菌种等都可提供）____________________

（1）依物理性质，该培养基属于___________培养基，依用途划分，则属于____________培养基。

（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是_____________

(3)该培养基中的碳源是______________  。

(4)若用该培养基选择能分解尿素的细菌，应除去的物质有______________，应加入的物质是_________

（5）使用高压蒸汽灭菌锅灭菌加盖时，拧紧固定盖子的螺栓，注意要__________________，使螺栓松紧一致不漏气。加热灭菌锅时，要先________（关闭、打开）排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气。通常是在温度为121 ℃、气压为100 kPa的条件下灭菌20分钟左右．灭菌完毕后，待压力表中指针指向0点、温度降至60℃以下后，取出灭菌物品。

人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

（1）微生物的分布：微生物主要分布在富含                 的土壤表层；不同微生物对pH值的要求不同，细菌常生活在                 性的环境中。

（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用                        和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用                   方法进行灭菌。

（3）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是               和             。

（4）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是                                                              。

（5）微生物的鉴定：为筛选出纤维素分解菌，应向培养基中加入                染料，将呈           反应，再依据培养基中是否产生                   来筛选纤维素分解菌；为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的              （选择、鉴别）培养基中加入              指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色。

（1）进行①过程的目的是            ；②过程所使用的接种方法是             。用该接种方法对微生物进行计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目             ，原因是                                  。

（2）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于        培养基，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→       →         。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备Ⅰ号培养基外，还要提供       的条件。此培养条件也是        （填“果醋”或“果酒”）制作过程中需要的。

（3）在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是    。

（4）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入             指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。理由是                                     。

（5）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h-48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如下表，其中          倍的稀释比较合适。假设每个平板分别接入0.1mL稀释液，据此可得出每毫升瘤胃液体中的活菌数为               个。

一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有1 L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1 mL至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样品中菌体数为________。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养基的特点是___________________________。

(3)接种技术的核心是___________________________。接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步____________________________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(4)在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是________，有透明圈菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。实验结果如下图所示，A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

→→→→

(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现          色环带。

(2)步骤X表示          。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即          和          。接种时所用的接种环通过          灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从          开始划线。

   (3)在培养时，需将培养皿倒置并放在          中。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的____________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

[生物——选修1：生物技术实践]

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

 （1）该种培养基可用来培养            的细菌。从用途看，这种培养基称为___ ____培养基。

（2）如果要通过统计培养基中的菌落数来估算样品中的细菌数，则在上述培养基中还需要添加 

        作为凝固剂，接种时应采用                  法才能达到目的。这种方法统计到的是样品中_______的数目，除了这种方法，还有                也是测定微生物数量的常用方法。在用不同浓度的稀释液培养得到的平板中，为保证统计的数目结果较为准确，一般选择菌落数在_______的平板进行计数。

（3）某同学从土壤中分离出目的细菌以后，若要对其作进一步的鉴定，可在上述的培养基中加入_______指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_______，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。

回答下列相关问题：

（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水水样滴加进去振荡均匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化是                    。

（2）图乙中滤膜的孔径应______（“大于”、“小于”或“等于”）大肠杆菌。

（3）制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是          ，待培养基冷却至   ℃左右时进行倒平板。

（4）为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入                染料，该研究机构通过统计______色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际值          ，（“偏高”、“偏低”或“相等”） 理由是                                                          。