豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题：

（1）该培养过程涉及多种现代生物工程技术，属于分子水平的是___________，其原理是______________________。

（2）PCR过程中，除了要加DNA模板以外，还需加________ 和________，以及所需的酶是_________。温度降低到55℃的目的是__________。

（3）PSP是______________识别和结合的部位，步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

（4）若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用___________法以获得大量的卵细胞。

（5）进行早期胚胎培养时，通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养，其中CO₂的主要作用是____________________；另外，需定期更换培养液，目的是___________________。

（6）步骤⑥中，通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

（7）与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是____________________________。

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________。

(1) 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—^↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶             切割质粒，用限制酶            切割抗虫基因。①过程在         (填“体内”或“体外”)进行。

(2) 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有              的培养基上，若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。

(3) 为在短时间内大量获得目的基因，可用                技术进行扩增，其原理是                 。

(4) ⑤过程所用技术称为                  ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有                     。

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中 NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：

（1）图中的结构A是__________，其主要作用是__________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有___________。

A：引物Ⅰ: ...GGGAATTC...；引物Ⅱ: ...CTCATATG...

B：引物Ⅰ: ...GAATTCCC...；引物Ⅱ: ...CATATGAG...

C：引物Ⅰ: ...GGAAGCTT...；引物Ⅱ: ...AAGCTTCC...

D：引物Ⅰ: ...CTCATATG...；引物Ⅱ: ...AAGCTTAAGCTT...

下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图完成下列问题：

（1）在基因工程中，A→B为_______技术，利用的原理是______________，其中①为_____________________过程。

（2）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是_______，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在分子水平上的鉴定过程（至少写出一个过程）。________________________________________________________

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的       _。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

MagaininmⅡ是非洲爪蟾皮肤分泌的一种抗菌肽，能对细菌、真菌、肿瘤细胞等产生明显的抑制效果。科学工作者通过基因工程技术获得能表达该种抗菌肽的大肠杆菌。请回答下列问题：

(1) MagaininmⅡ基因能与运载体能结合，是由于它们在结构上具有                                 等共同点；能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽，其原因是                                   。

(2)用PCR技术对MagaininmⅡ基因进行扩增时,加热至       ℃使MagaininmⅡ基因解链为单链，            与该单链中的相应互补序列结合，然后在Taq酶的作用下进行延伸。

(3)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点，则筛选出导入重组质粒的受体菌的方法是                                                                 。

根据下列所给材料回答问题：

材料Ⅰ：鱼的抗冻蛋白基因烟草细胞→抗冻烟草

材料Ⅱ：蜘蛛的丝腺蛋白基因羊的受精卵→转基因羊→产生丝腺蛋白

材料Ⅲ：人的胰岛素基因大肠杆菌→生产人的胰岛素

（1）上述生物新品种的产生所共同运用技术的核心步骤是                 。

（2）材料Ⅰ中，需要将鱼的抗冻蛋白基因与载体结合，作为载体必须具备条件之一是含有标记基因，该基因的作用是                。下图为含鱼的抗冻蛋白基因的DNA片段：

用该DNA片段经EcoRⅠ限制酶切割后共形成      个黏性末端，若图示DNA片段中EcoRⅠ限制酶识别序列的一个碱基突然改变，则可能发生的情况是                                           ；若需在短时间内获得较多的该外源基因，通常采用PCR技术,。该技术的反应体系的主要成分应包含：_______________（写四种）。其反应过程中引物与模板DNA链结合依靠                          原则完成。

（3）材料Ⅱ中，目的基因在羊乳腺细胞中表达，表达成功的标志是            ，为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，需用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的粘性末端不同)同时切割含目的基因的DNA片段和质粒。若用Ti质粒作为目的基因的载体，应选用下图中何种Ti质粒？                           

（4）材料Ⅲ中，将目的基因导入大肠杆菌，首先用       处理大肠杆菌，使之成为                           细胞。