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          共50条信息

            • 1．

              豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题：

              （1）该培养过程涉及多种现代生物工程技术，属于分子水平的是___________，其原理是______________________。

              （2）PCR过程中，除了要加DNA模板以外，还需加________ 和________，以及所需的酶是_________。温度降低到55℃的目的是__________。

              （3）PSP是______________识别和结合的部位，步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

              （4）若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用___________法以获得大量的卵细胞。

              （5）进行早期胚胎培养时，通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养，其中CO2的主要作用是____________________；另外，需定期更换培养液，目的是___________________。

              （6）步骤⑥中，通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

              （7）与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是____________________________。

              难度：中等
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            • 2． 为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

              （1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的______。
              （2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的______端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是______。
              （3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中______的设定引物有关，______的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）
              ①变性温度②退火温度   ③延伸温度④变性时间⑤退火时间   ⑥延伸时间
               （4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

              图中虚线框内mRNA片段包含______个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有______种。
              （5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：

              缓冲液

              50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4

              50mmol/L Tris-HCl

              50mmol/L Gly-NaOH

              pH

              6.0

              6.5

              7.0

              7.5

              7.5

              8.0

              8.5

              9.0

              9.0

              9.5

              10.0

              10.5

              酶相对活性%

              25.4

              40.2

              49.8

              63.2

              70.1

              95.5

              99.5

              85.3

              68.1

              63.7

              41.5

              20.8

              根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________。

              难度：较难
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            • 3． 下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列问题。

              (1) 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶             切割质粒，用限制酶            切割抗虫基因。①过程在         (填“体内”或“体外”)进行。

              (2) 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有              的培养基上，若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。

              (3) 为在短时间内大量获得目的基因，可用                技术进行扩增，其原理是                 。

              (4) ⑤过程所用技术称为                  ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有                     。

              难度：较难
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            • 4．

              嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中 NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：



              （1）图中的结构A是__________，其主要作用是__________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有___________。

              （2）用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用__________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有__________（多选）。
              ①反应温度   ②缓冲液pH   ③限制酶的浓度   ④DNA样品的纯度
              （3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加______，整个实验过程应保持__________操作。
              （4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_____________。

              A：引物Ⅰ: ...GGGAATTC...；引物Ⅱ: ...CTCATATG...

              B：引物Ⅰ: ...GAATTCCC...；引物Ⅱ: ...CATATGAG...

              C：引物Ⅰ: ...GGAAGCTT...；引物Ⅱ: ...AAGCTTCC...

              D：引物Ⅰ: ...CTCATATG...；引物Ⅱ: ...AAGCTTAAGCTT...

              难度：较难
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