9.
嗜热菌可以生活在98 ℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答:
(1) 图中的结构A是__________,其主要作用是提供_______________特异性识别结合位点,驱动基因转录。一个完整的基因表达载体的组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有______________。
(2) 用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用__________两种限制酶进行切割
(3) 将重组质粒导入大肠杆菌细胞之前,一般需先用______溶液处理大肠杆菌,以便将基因表达载体导入细胞。重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加__________,整个实验过程应保持____________操作。
(4) PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是________。
A. 引物Ⅰ:…GGGAATTC…;引物Ⅱ:…CTCATATG…
B. 引物Ⅰ:…GAATTCCC…;引物Ⅱ:…CATATGAG…
C. 引物Ⅰ:…GGAAGCTT…;引物Ⅱ:…AAGCTTCC…
D. 引物Ⅰ:…CTCATATG…;引物Ⅱ:…AAGCTTAAGCTT…