[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

（1）我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得     、     、延熟的转基因作物。

（2）引物是根据      的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是                      。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在                         。

  （3）PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是                  。

（4）检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。据图分析：含有三种转基因的农作物是    ，判断依据是         。

  （5）与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA^↓TATG、G^↓AATTC、A^↓AGCTT、G^↓TCGAC。请分析回答：

(1)图中的结构A是________，其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有________。

(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

(3)实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加________，整个实验过程应保持________操作。

(4)PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是________。

A.引物Ⅰ：···GGGAATTC···；引物Ⅱ：···CTCATATG···

B.引物Ⅰ：···GAATTCCC···；引物Ⅱ：···CATATGAG···

C.引物Ⅰ：···GGAAGCTT···；引物Ⅱ：···AAGCTTCC···

D.引物Ⅰ：···CTCATATG···；引物Ⅱ：···AAGCTTAAGCTT···

【选修3—现代生物科技专题】

   2016年日本动物学家培育出转基因“绿光猴”，其培育过程为：将能编码绿色荧光蛋白基因嵌入长尾猴的卵子中，使其受精，所生下的小猴受到紫外线照射时就成了全身发绿的“绿光猴”。

请据此回答下列问题：

（1）如果对已有的荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到________酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。

（2）绿色荧光蛋白基因需要构建成________之后，用________方法将其导入到长尾猕猴的卵子中。

（3）受精卵在体外培育成________后再利用________技术将其导入到受体猕猴的子宫中继续发育，检测所出生的猕猴是否为“绿光猴”通常用________方法。

(1)向小型猪转入外源基因时．其受体细胞通常是________ ，导入方法是________ .

(2)PCR技术扩增目的基因的过程是：目的基因DNA________变性后解旋为单链，降温后 ________与单链相应互补序列结合，然后在________酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的数量扩增.

(3)欲知基因工程成功与否，需要进行________水平的检测，有时还需进行 ________水平的鉴定.
(4)基因工程的“剪刀”是________，基因工程中使用的载体包括________、________  和________.