豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题：

（1）该培养过程涉及多种现代生物工程技术，属于分子水平的是___________，其原理是______________________。

（2）PCR过程中，除了要加DNA模板以外，还需加________ 和________，以及所需的酶是_________。温度降低到55℃的目的是__________。

（3）PSP是______________识别和结合的部位，步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

（4）若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用___________法以获得大量的卵细胞。

（5）进行早期胚胎培养时，通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养，其中CO₂的主要作用是____________________；另外，需定期更换培养液，目的是___________________。

（6）步骤⑥中，通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

（7）与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是____________________________。

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________。

植物体内含有多种有效成分，不同的有效成分提取的方法不同。请回答下列问题。

(1)橙花油是制作高级香水的主要原料，由于它具有化学性质稳定，难溶于水_______________________________的性质(答出两点)，橙花油的提取过程：鲜橙花+清水→A→油水混合物→B→除水→橙花油。上述流程中的A表示___________过程，在得到的油水混合物中加入________可以促进油和水分层。B过程常需要用到的仪器是___________，完成除水过程需要加入_______________。

(2)要提高精油的品质，在操作中需要___________蒸馏的时间。

(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和____________，以提高萃取效率。鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用__________法，在鉴定的过程中需要用__________________作为对照。为了验证萃取物是否是胡萝卜素，该同学将叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素、萃取物和色素混合液（含叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素和胡萝卜素）依次点样在滤纸的 1、2、3、4、5 位置（如图甲所示），并进行分离，滤纸条上各色素带的位置为图中_____________（填字母）时，即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。

(4)经常食用胡萝卜可预防夜盲症和干皮症，原因是一分子β-胡萝卜素在体内可氧化成两分子_________。现代工业可用微生物发酵来生产胡萝卜素，就是把控制β-胡萝卜素_____________（填：“合成的酶”或者“合成酶的基因”）导入酵母菌，随后培养该种酵母菌。

(1) 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—^↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶             切割质粒，用限制酶            切割抗虫基因。①过程在         (填“体内”或“体外”)进行。

(2) 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有              的培养基上，若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。

(3) 为在短时间内大量获得目的基因，可用                技术进行扩增，其原理是                 。

(4) ⑤过程所用技术称为                  ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有                     。

根据植物有效成分的提取等相关知识回答下列问题

Ⅰ：胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：

（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用___________或平板划线法接种。所用培养基从功能上分属于____________。

（2）培养酵母菌R时，在提供四种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物对Ph、________________以及氧气的要求

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好____________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用 _________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是____________

（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素，鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为       。

Ⅱ：植物芳香油提取的最常用方法是___________ ，向收集到的乳浊液中中加入氯化钠有利于________，分离的油层中还需加入__________吸水

下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图完成下列问题：

（1）在基因工程中，A→B为_______技术，利用的原理是______________，其中①为_____________________过程。

（2）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是_______，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在分子水平上的鉴定过程（至少写出一个过程）。________________________________________________________

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的       _。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

MagaininmⅡ是非洲爪蟾皮肤分泌的一种抗菌肽，能对细菌、真菌、肿瘤细胞等产生明显的抑制效果。科学工作者通过基因工程技术获得能表达该种抗菌肽的大肠杆菌。请回答下列问题：

(1) MagaininmⅡ基因能与运载体能结合，是由于它们在结构上具有                                 等共同点；能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽，其原因是                                   。

(2)用PCR技术对MagaininmⅡ基因进行扩增时,加热至       ℃使MagaininmⅡ基因解链为单链，            与该单链中的相应互补序列结合，然后在Taq酶的作用下进行延伸。

(3)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点，则筛选出导入重组质粒的受体菌的方法是                                                                 。

下图表示生物实验中通过研磨提取有关物质的操作过程，请回答下列问题。

（1）若图示为“DNA的粗提取与鉴定”的实验操作：

①图中实验材料A可以是下面的            。（填字母）

a．花菜       b．香蕉    c．猪肝    d．猪血

②若选用植物组织，研磨前加入的B一般为洗涤剂和           ，加入洗涤剂的作用是           。

③实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入2mL下表所示的3种溶液中，经搅拌后过滤，获得相应的3种滤液，含DNA最少的是滤液       。

（2）若图示为“检测生物组织中的还原糖”的实验操作：在检测滤液C中是否含有还原糖时，向C中加入的是            色的斐林试剂，欲得到实验结果，还需要进行的步骤是           。

（3）若图示为“叶绿体色素的提取和分离”的实验操作：

①研磨前加入的B应包括无水乙醇、                   ，将研磨液进行过滤时，需要在漏斗基部放上              。

②分离色素时用培养皿盖住小烧杯的目的是                      。