为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）。

请回答：

（1）获得大量目的基因常用________技术，其原理是_________。

（2）步骤②中，用Ca^2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。

（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_______（填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。

（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与________形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

（5）除了基因工程外，细胞工程和胚胎工程也在人类生活中发挥了巨大作用。例如“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。“试管婴儿”的诞生实际上结合了________、早期胚胎培养、胚胎移植等多种技术手段。再如，通过动物细胞杂交技术制备的单克隆抗体具有__________和灵敏度高等特性，因而广泛应用于疾病的检测、肿瘤的定位等方面。

下面是获取某种二倍体抗虫植株的技术流程图：

请完成下列问题：

（1）上图中二倍体植物愈伤组织是外植体在适宜的_________________及温度、PH等条件下培养形成的，这一过程被称为___________。

（2）在获取抗虫植物的技术流程中，______________ 、__________________和工具酶等物质均来自微生物。

（3）下图中A、B、C、D四段DNA单链是根据毒蛋白基因对应片段合成的。假定在该DNA复制中，其中以a链为模板的复制，其子链是由左向右延伸的。

则在流程图的过程①中应选择___________（填字母）作为引物。如果选取的引物，使过程①的效率很低，则所选的引物中可能存在___________和_______________。

（4）如果要获取检测毒蛋白的单克隆抗体，通常要在动物细胞工程中_________和__________ 等技术的支持。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种．

（1）从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，然后利用　   　_________技术分别进行扩增．

（2）如图1，选用图中的限制酶_____处理两个基因后再用_____酶处理，得到　   　_________（填图中字母）端相连的融合基因．

（3）将上述融合基因插入图2所示Ti质粒的T﹣DNA中，构建_______并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含_____的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，得到用于转化的浸染液．

（4）剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是_____，进一步筛选后获得转基因油菜．

（5）用DNA﹣RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了_____（转录、翻译）．

（6）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有__________________ ,__________________  ，_________________。

（7）下图是四环素抗性基因的一个片段。已知某种限制酶异性地作用于①部位，请表示切割后的一种产物：________。

（8）基因工程也可以用于制药行业，下列属于利用基因工程生产的药物有_______（多选）

A．干扰素               B．青霉素      C. 乙肝疫苗           D．性激素

如图是科学工作者利用苏云金杆菌体内的抗虫基因培育转基因抗虫水稻的培育过程。请据图回答下列问题：

（1）实验中如果用EcoR Ⅰ切割多个外源DNA片段和质粒，则酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有    种，实验中最好选择               切割外源DNA片段和质粒。

（2）图示中属于脱分化阶段的是            （填序号），该过程需要在培养基中添加营养物质和                等成分。

（3）转基因抗虫水稻的目的基因是否完成表达，从分子水平上的检测方法是          ，从个体水平上的检测方法是                             。      

（4）科学家发现该抗虫毒蛋白的杀虫效果不佳，然后通过            或基因合成，对现有抗虫毒蛋白进行改造，这项技术属于               工程。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

科学家利用生物工程技术，探究猪骨形态发生蛋白15(bmP15)基因具有表达特异性和示踪干细胞诱导分化为类卵母细胞的潜能。通过扩增猪bmP15基因的启动子片段与增强型绿色荧光蛋白（EGFP)基因构建表达载体，该工程技术基本流程如下图。请回答下列问题：

（1）利用___________技术扩增bmP15基因的启动子片段的前提是要有一段已知核苷酸序列，以便合成__________。

（2）过程①中，应先用限制酶________________处理表达载体1,以便插入bmP15基因的启动子构建表达载体2。

（3）过程②中，常采用___________技术将表达载体2成功导入受体细胞。

（4）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的___________，以防污染；还需通入一定浓度的C0₂,目的是_________________。

（5）在实验结果的基础上，利用标记的_______基因作探针，与猪羊水干细胞的mRNA进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。

（6）实验说明，bmP15基因启动子调控下EGFP基因在____________细胞表达。

人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图所示。

(1)卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠__________中获取。

(2)图中的高血压相关基因作为___  __,质粒作为________,二者需用__________切割后用DNA连接酶连接成重组载体,该过程与质粒上含有__________有关.

(3)子代大鼠如果________________________________和______________，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。

(4)在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是________、早期胚胎培养和胚胎移植。

下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图完成下列问题：

（1）在基因工程中，A→B为_______技术，利用的原理是______________，其中①为_____________________过程。

（2）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是_______，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在分子水平上的鉴定过程（至少写出一个过程）。________________________________________________________

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）人体DNA的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_________________________________

_______________连接。

（2）DNA解旋酶直接作用于脱氧核苷酸之间的           键（化学键）；DNA限制酶直接作用于脱氧核苷酸之间的           键（化学键）。

（3）获得人乳铁蛋白基因的目前常用方法有                 、利用PCR技术扩增目的基因和根据已知蛋白质中的氨基酸序列推知基因的脱氧核苷酸序列再进行化学合成。

（4）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用限制酶_________________________同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__________的培养基上进行。

（5）人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达时RNA聚合酶识别和结合的位点是                ，由该酶催化其合成的产物是                          （填具体内容）。

（6）为检测牛基因组中是否含有人乳铁蛋白基因可采用                      技术。

（7）①过程的受体若是双子叶植物和裸子植物，则采用最多的方法是               。

在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以发荧光。荧光素酶及其合成基因在生物研究巾有着广泛的应用。请回答下列问题：

      (1)荧光素酶基因可以人工合成，也可以从    中获取。利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用  的原理。

      (2)限制酶是切割DNA的工具酶，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是     

(3)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是       ，荧光素酶基因也可以作为将为目的基因转入某些动植物细胞中表达产生荧光素酶。将目的基因导入植物细胞的技术中，最常用的是____。

 (4)下列关于质粒运载体的说法正确的是________（多选）。
      A.没有限制酶就无法使用质粒运载体

      B.质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞

      C.质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

      D.质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则

      E.质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的DNA中才能表达

 (5)将目的基因导入植物细胞，目前常用的目的基因载体是Ti质粒，目的基因需插入到该基因载体的     上。将导入荧光素酶基因的植物细胞，可经过  形成转基因植株。

在20世纪初，科学家用植物细胞杂交方法，将白菜的原生质体和甘蓝的原生质体融合，成功地培育出了“白菜—甘蓝”杂种植株，据图回答下列问题：

（1）过程b完成的标志是      。要促进杂种细胞的分裂生长，培养基中应有营养物质和激素，其中激素包括        和           两类植物激素。

（2）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的原理是          ，c涉及的分裂方式为                  。

（3）若白菜细胞内有m条染色体，甘蓝细胞含n条染色体，则“白菜—甘蓝”细胞内含     条染色体；若杂种细胞培育成为“白菜—甘蓝”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于几倍体植株？       。

（4）利用基因工程菌生产药物目前已经成为了一项成熟技术，如图所示为将人类的白细胞介素2基因（白细胞介素2是一种具有免疫活性的可溶性蛋白质）导入到大肠杆菌体内，获得能够生产白细胞介素2的“工程菌”的示意图，结合所学知识回答下列问题：

为了培育含有人类的白细胞介素2基因工程菌，需要大量的目的基因，这可利用________技术在体外进行，该项技术是利用DNA复制的原理，使基因数量呈指数方式增加。

（5）在构建基因表达载体过程中，需要利用到的基因工程工具有________，图中构建好的基因表达载体中作为标记基因的是________。

（6）基因工程制药中经常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞的原因是________。以细菌为转化对象时，要用Ca2＋处理细胞，使之处于感受态，这种状态下细胞的特点是________。

（7）在筛选已经成功导入目的基因的细胞时，可以利用含有________的培养基进行，最终确定目的基因成功转化，即产生白细胞介素2则可采用________技术。