关于蛋白质工程的基本流程，下列叙述正确的是

①蛋白质分子结构设计②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列

蛋白质工程技术发展迅速，蛋白质工程

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。回答下列问题：

(1)根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是      ，原因是      。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要      酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是     识别和结合的部位。

(2)研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是      。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是              

材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

材料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。

回答下列问题：

（1）获取目的基因的方法有_________________ 、PCR技术扩增法和__________________，其中PCR扩增目的基因时需要的条件有_________、引物 、_______________四种脱氧核苷酸。

（2）材料甲属于基因工程的范畴。基因工程的核心步骤是_________________，该过程常用的工具酶有________ 和 ________   。将重组DNA分子导入小鼠受精卵中常用的方法是_______________，在培育转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌细胞内的________上具有的________可携带着外源基因整合到植物细胞________上。

（3）牛的生长激素基因之所以能整合到小鼠基因组中，所依据的物质基础和结构基础分别是组成小鼠和牛的DNA分子都是_______________和__________________。

（4）材料乙属于_______  _  工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对________ 进行改造，或制造一种 ________的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的________序列发生了改变。

（5）在目的基因的检测和鉴定时，检测目的基因是否导入受体细胞、是否转录出RNA、是否翻译出相关的蛋白质时所用的方法分别是_________________ 、_________________、 _________________。

【生物—选修3：现代生物科技专题】

  科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了H5N1禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，下图为单克隆抗体制备过程示意图，图中A～G分别表示生物技术或细胞名称，请回答有关问题：

（1）若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的细胞，C过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导因素是＿＿＿＿＿＿。

（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成3种类型的D细胞，因此需用＿＿＿＿培养基筛选出＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的E细胞用于培养。

（3）在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是＿＿＿＿。随着细胞分裂次数的增多，就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的＿＿＿＿，需要用胰蛋白酶等处理使细胞从瓶壁上分离下来。

（4）如果将单克隆抗体基因导入奶牛受精卵，再通过早期胚胎培养和＿＿＿＿＿＿＿＿，可获得多头奶牛，从而从乳汁中提取更多的抗体；欲获得活性更强的抗体，可通过＿＿＿技术对基因进行修饰，以实现目的。