（1）若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高，______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

(2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

（3）获得目的基因，获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA，然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

（4）卵巢经超数排卵处理后，要使用__________________确定卵泡的位置。     

 科研人员单独培养胚胎干细胞，首先需要在培养皿底部制备一层______细胞，称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞，用于移植。

（5）植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

科学家利用转基因技术将人的高血压相关基因导入大鼠受精卵，培育遗传性高血压转基因模型大鼠，以研究遗传性高血压的致病机理及筛选有效的治疗药物。请回答：

(1)获得目的基因后，常利用_________技术在体外将其大量扩增。在构建基因表达载体的过程中，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、复制原点和__________。

(2)将人的高血压相关基因导入受精卵中的最有效方法是______________。

(3)在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入________等一些天然成分，还需要提供CO₂以维持______________。

(4)胚胎移植前应保持供体和受体的_______相同，所以要对供、受体鼠进行________处理。

(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行_______，然后接种到培养基中培养，幼胚发生_______形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及_______（答 2点即可）。

（3）取适量含产脲酶细菌的10^-4、10^-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_____(A. 10^-5稀释液+尿素固体培养基        B. 10^-5稀释液+LB固体培养基     C. 10^-4稀释液+尿素固体培养基         D. 10^-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_____，其原因是细菌产生的脲酶催化_____分解产生_____所致。

如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库______基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）．

（2）（2）①过程提取的DNA需要__________的切割．

（3）（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用________扩增的方法，其原理是___________．

（4）（4）目的基因获取之后，需要进行_________，其组成，必须有_________、________、_______以及标记基因等．此步骤是基因工程的核心．

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）抗虫棉中转入的Bt毒蛋白基因是从苏云金(芽孢)杆菌中分离出来的，该基因编码的Bt蛋白对哺乳动物        （填“有”或“无”）毒害作用。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行       ，使其具有更广杀虫范围，属于           （生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和           三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设。

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、          、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的              原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了       原理。

（3）甘肃陇南地区的“九子登科”模式是哪种生态工程建设的实例？（ ）

A.草原生态恢复工程              B.城市环境工程

C.小流域综合治理生态工程    D.湿地生态恢复工程

利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄.该过程需要用多种限制酶,下图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点.

请回答:

（1）上述限制酶在特定位点切割DNA,其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______切割后产生了____________末端.

（2）利用EcoR I和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因,可与被EcoR I和Sam I酶切后的质料连接成重组质料,原因是___________

（3）重组质料导入番茄后,欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA,需利用__________作探针.

（4）利用抗冻蛋白制备出相应的__________,然后进行抗原-抗体杂交,观察到杂交带出现,尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功.因此,还应将转基因番茄__________,以确定其耐寒能力是否提高

(1)下列有关现代生物技术的叙述正确的是__________。

   A．基因工程与蛋白质工程都能制造出新的蛋白质
    B．动物细胞培养时通常需要添加血清
    C．动物的早期胚胎发育依次经过受精卵、卵裂、桑椹胚、孵化、囊胚、原肠胚等阶段
    D．DNA连接酶和DNA聚合酶都能使核苷酸之间形成磷酸二酯键，属于同一种酶
(2)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是__________；
(3)植物组织培养的主要原理是植物细胞具有__________，具体过程是在__________和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过__________产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
(4)克隆动物实际上是用__________方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的__________细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
(5)生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）：________________________________________。