人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白.如图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程,图中Tet
r表示四环素抗性基因,Amp
r表示氨苄青霉素抗性基因,五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示,请回答以下问题:
限制酶 | BamHⅠ | HaeⅢ | BclⅠ | Sau3AⅠ | NotⅠ |
识别序列 及切割位点 | | | | | |
(1)①过程常采用的方法是 ______ .
(2)构建基因表达载体时,需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和 ______ 之间,这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达.
(3)要将人乳铁蛋白基因插入质粒,若只允许使用一种限制酶,应选择的限制酶是 ______ .
(4)据图分析,筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含 ______ (填“四环素”或“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”)的培养基上进行,原因是 ______ .
(5)若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来,连接部位的6个碱基对序列为 ______ ,对于该部位,这两种酶 ______ (“都不能”或“只有一种能”)切开.