2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”。三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。

据图回答下列问题：

(1)由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射________激素，促使一次有更多的卵泡发育。

(2)重组细胞需培养到MⅡ中期的原因是该时期的卵母细胞才具备________。

(3)从受精卵到三亲婴儿的培育还需要________和________等技术。

(4)三亲婴儿的培育技术________(填“能”或“不能”)避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，而________(填“能”或“不能”)避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。三亲婴儿的染色体________(填比例)来自母亲提供的细胞核。

(5)设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行____________________。

(6)我国对于“克隆人”这一技术总体上来说是禁止________性克隆，但不反对________性克隆。

科学家用转基因克隆技术将人的岩藻糖转移酶基因植入牛的基因组内，使其在牛奶中含有岩藻糖抗原。这种转基因牛奶可作为口服药，用来防治各种胃病，具有重要的医学价值和经济社会价值。转基因克隆牛的过程示意如下。

（1）上述流程图中用到的生物工程技术除基因工程外，还用到的技术有_____________、_____________、____________、___________________。

 (2)在岩藻糖转移酶的cDNA融合基因的首端需加上牛乳蛋白启动子序列，目的是______。

（3）在细胞核移植时通常选用_____________________时期卵母细胞作受体细胞。这个时期的卵母细胞可在母牛的_______________中直接获得。核移植成功后，用物理或化学方法激活受体细胞，目的是________________。

(4)重组细胞在发育培养液中培养，培养液成分除无机盐、有机盐、维生素、激素等营养物质外，还需特别添加________等物质，形成的早期胚胎一般要发育到______________阶段才进行移植，胚胎移植成功与否的关键是________。

I.现有五种不同的抗生素（甲、乙、丙、丁、戊），要测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。图1表示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上，分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果（图中●为添加点）。图2表示这五种抗生素对成人产生毒副作用的剂量。请回答：

              图1                                                  图2

（1）由图1可知，_______种抗生素的抗菌效果最好。

（2）如果给予剂量为2mg，那么________种抗生素最适宜成人使用，理由是_____________。

（3）已知丁种抗生素作用的原理是抑制金黄色葡萄球菌细胞壁的形成，由此推测该种抗生素对成人的毒副作用较小的可能原因之一是___________________________。

（4）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时宜进行____________（填“涂布平板”或“平板划线”）操作。实验过程中，与用于计数的平板接种不同的是本实验要保证滴加到培养基上的菌液_______________，以缩短培养时间。

（5）本实验过程中所使用的无菌技术，除用来防止培养物（金黄色葡萄球菌）被其他外来微生物污染外，还能_______________。

                                            图1

（1）如图1所示，将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中，该技术称为_________技术；供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是_________________________。

（2）胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对其进行_______处理。

（3）采用SRY-PCR法进行性别鉴定的基本程序是提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检测。

①PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，还应含有____________；其中，dNTP的作用是____________________________________，引物应选用图2中的________（填图中标号，图2中I、II、III、IV是引物，箭头是延伸方向）。

                              图2

②若扩增产物含大量SRY基因片段，则该种牛胎儿成纤维细胞______（填“能”或“不能”）用作图1所示技术流程中转化过程的受体细胞。

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)回答固定化酶有关问题

    (1)制备固定化α－淀粉酶的过程中，将α－淀粉酶固定在石英砂上的方法是______，一定浓度的淀粉溶液经过______后，可使淀粉水解为______，遇碘显______色，此实验最适温度为______。

    (2)关于固定化酶中的酶说法正确的是______。

    A．酶的种类多样性，可催化一系列的酶促反应

    B．酶被固定在不溶于水的载体上，可反复利用

    C．酶作为催化剂，反应前后结构不改变，所以固定化酶可永远利用下去

    D．固定化酶由于被固定在载体上，所以丧失了酶的高效性和专一性特点

    (二)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

    据图回答：

    (1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用___________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含______的培养基上进行。

    (2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是______(填字母)。

      A．amp^R    B．启动子    C．终止子    D．复制原点

    (3)过程①可采用的操作方法是______(填字母)。

    A．农杆菌转化    B．显微注射    C．大肠杆菌转化    D．细胞融合

    (4)过程②采用的生物技术是_____________。

    (5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的______性。

    (6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用______(填字母)技术。

    A．核酸分子杂交    B．基因序列分析    C．PCR D．抗原一抗体杂交

如图为成熟精子的结构示意图，请据图回答问题：

(1)④由______________演变而成；在体外受精时，精子首先要进行获能处理，通常采用的体外获能方法有_______________和____________两种；卵细胞则要培养到______________期才具备与精子受精的能力。

(2)获能的精子穿越放射冠和透明带，进入卵黄膜完成受精作用，会产生两次生理反应，阻止其他精子入卵，它们是_________、______________。

(3)人的体外受精胚胎在4个细胞阶段就可以移植，而牛、羊一般要培养到_______________阶段才移植。通过胚胎培养获取胚胎干细胞，常从囊胚中分离__________的细胞，再继续培养扩增。

某男性表现型正常，其一条13号染色体和一条21号染色体发生了图1所示变化。该男性与某染色体组成正常的女性婚配，所生的三个子女染色体组成如图2所示。据图回答：

（1）图1所示的染色体变异类型有____，该变异可发生在____分裂过程，观察该变异最好选择处于____（时期）的胚胎细胞。

（2）若不考虑其他染色体，在减数分裂时，图2中男性的三条染色体中，任意两条到细胞一极，另一条移向细胞另一极，则其理论上产生的精子类型有____种，该夫妇生出正常染色体组成的孩子的概率为____。参照4号个体的染色体组成情况，画出3号个体的染色体组成。

（3）为避免生出有遗传缺陷的小孩，1号个体在妊娠期间应进行____。为便于筛除异常胚胎，医生建议这对夫妇选择“试管婴儿”技术，该技术涉及的两个主要环节是____。

以下为人工合成 reAnti 基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）基因工程的核心是 ________  (用序号回答）

（2）基因工程基本工具之一的限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，大多数限制酶的识别序列是由________个核苷酸组成。                                  

（3）在基因工程中使用的载体除质粒外，还有________、噬菌体衍生物等。

（4）目的基因进入受体细胞，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 ________。                                                                                                                                  

（5）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过 DNA 分子杂交技术，  来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的________上。

（6）从猪中取胎儿成纤维细胞，用胰蛋白酶处理，然后进行分散培养。多数细胞生存的适宜 PH 范围是________。

（7）去核前的卵母细胞应培养到________期。其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完

成细胞________，在体外培养成重组早期胚胎。

（8）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________处理。

(1) 要实现①超数排卵,应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用______处理,然后在恰当时期采集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精,要对精子进行____处理,对羊的精子常用化学诱导法,即用一定浓度肝素或钙离子载体A23187溶液对精子进行诱导。 

(2) 若要大量获得目的基因,可使用____扩增白蛋白基因。要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括__________、____、目的基因、标记基因等部分。 

(3) 过程④需将重组质粒用____方法注入受精卵的雄原核内,在显微镜下判断是否受精的标志是____________。 

(4) 对移植前的胚胎进行性别鉴定时,宜取囊胚期的______细胞进行鉴定,一般釆用SRY-PCR方法,选择出现阴性反应的____(性别)胚胎进行移植。 

(5) 在胚胎移植前,通过____技术可获得较多胚胎。移植后的胚胎能在受体子宫中存活,其生理基础是________________。进行胚胎移植的优势是可以充分发挥________________。

图2

(1) 图1中构建的重组表达载体,目的基因的上游应有____,它是____酶识别和结合的部位,驱动基因的转录。 

(2) 在图1过程③中,用____激素处理以获取更多的卵(母)细胞,这些卵(母)细胞需在体外培养到_______期,方可进行过程④的操作。 

(3) 图1中过程④采用的生物技术是______,得到的重组细胞发育为早期胚胎后,可通过____技术获得较多胚胎。 

图3

利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。科研人员通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白，其技术路线如图所示。请回答下列问题：

(1)基因工程的第一步是获取目的基因。目的基因可以从自然界已有的物种中分离，也可以人工合成。可以通过________技术扩增目的基因。利用该技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、____________、4种脱氧核糖核苷酸和模板(人凝血因子Ⅸ基因)。

(2)图中过程①为基因工程的核心，则A表示的结构是________。将A导入绵羊胎儿成纤维细胞的常用方法是________________。筛选整合有目的基因的成纤维细胞时，常用的检测方法是____________。

(3)欲获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，可用________酶处理绵羊组织块。图中所用的去核卵母细胞一般处于____________期。

(4)进行胚胎移植时，代孕母羊需要注射激素，以实现____________。