回答有关基因工程和胚胎工程的问题：

I .抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值。昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～ 6℃，鱼的热滞值为0.7～1.5℃。因此，昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力。为了扩展一些植物的生存范围，科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）的异源表达，现已成功地提高了烟草的抗冻能力。请分析回答相关问题：

（1）基因工程的核心步骤是__________________，这一过程需要的工具酶是____________________。将AFPS基因导入烟草细胞中，常用____________法，这是因为烟草属于双子叶植物，此操作过程中使用的运载体是___________。

（2）若检测是否产生抗冻蛋白，一般采用_________方法进行分子水平的检测。

II .胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

（1）有时需要将早期胚胎分割，提高胚胎的利用率。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意                 ，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。

在对囊胚阶段的胚胎做DNA分析性别鉴定时，所取的样本是          细胞。

（2）试管牛能在受体子宫中存活的生理基础是                      。

（3）胚胎干细胞培养也是一项重要的胚胎工程技术。胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的，在功能上具有           ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。在体外培养条件下，为保持胚胎干细胞的未分化状态，通常在培养皿中铺上一层          细胞或培养在添加了抑制因子的培养液中。

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的     　　　   。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到      　　 期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的           设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有       　　　　　　　　　  酶的酶切位点。

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的   　　    ，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

⑴对猪基因组进行改造，可以选择某种有调控作用的目的基因，重组后导入受体细胞，以达到抑制猪抗原决定基因             的目的。进行 DNA重组时需要使用的工具酶是                                               。

⑵选择猪胚胎干细胞作为受体细胞，胚胎干细胞是由              或            中分离出来的一类细胞。将目的基因导入后，利用标记基因的作用               含有目的基因的受体细胞。

⑶将含目的基因的胚胎干细胞注入猪的囊胚，而后将囊胚通过                          技术移入受体子宫，获得转基因猪。

⑷采用核移植技术克隆转基因猪时，应选用处于                期的卵母细胞作为受体细胞；随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞，经诱导分化形成多种器官，这是利用了胚胎干细胞的                                。

    （1）ES细胞来自于__________，ES细胞在功能上具有____________，当培养在__________上时，细胞只分裂不分化。

    （2）将绿色荧光蛋白基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成脂质体中，利用脂质体将融合基因表达载体转染到ES中，此过程中绿色荧光蛋白基因表达载体进入ES细胞的方式是为_______。在ES细胞的培养过程中，环境中必须保持一定浓度的CO₂，其目的是__________________。

    （3）为检验ES细胞的染色体上是否含有绿色荧光蛋白基因，在分子水平上可以采用________________方法检测；在细胞水平上，可用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可以确定，细胞内有______现象的ES细胞转染了绿色荧光蛋白基因。筛选出转染了绿色荧光蛋白基因的ES细胞，用显微注射法注入到囊胚内的_______部位，将来发育成具有荧光嵌合现象的小鼠。

    （4）图X代表的操作是_____________；甲在乙体内存活的生理学基础是_____________。

（1）图中过程③表示                   技术。

（2）重组细胞在体外培养时，培养液中除了加入诱导物和水、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸等必需的营养成分外，往往需要特别加入            ，同时在含5%的         的无菌、恒温培养箱中进行培养。

（3）胚胎干细胞一般是从                         中分离出来的一类细胞，在功能上具有                      。

（4）定向诱导使重组细胞B发生                     ，从而形成功能专一的胰岛样细胞。

(1)步骤①的技术名称是________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其________中分离出ES细胞。

(3)将基因导入ES细胞常用的方法是________，将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞在功能上具有________。

(4)据图分析，在步骤③中构建含有干扰素基因的表达载体时可选用限制酶的组合为________。基因表达载体中除图示组成外还应包含________、终止子、复制原点等。

(5)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用________的方法。

（1）来源：___________________。

（2）特点：①形态：体积__      _、细胞核__       _、___               __明显

         ②功能：具有发育的____         ___

         ③体外培养：可增殖而不______   ___