Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的________发育而来，所采用的技术应为________，培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、________等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的________细胞，ES在形态上表现为________。

（3）由于物种间存在________，因此自然情况下哺乳动物远亲物种问的配子往往无法完成________作用，或者即便能完成也不能发育，但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠一大鼠、人—鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞中通常含有________个染色体组。

（1）胚胎干细胞可由囊胚的_______细胞分离培养获得。

（2）利用PCR技术扩增干扰素基因时，需在______________酶的作用下进行。PCR技术主要利用了______________的原理。

（3）将经过修饰的腺病毒与干扰素基因重组形成的______________转移到ES细胞中，筛选出成功转移的细胞进行扩增培养。

（4）有人得到如图所示的含有目的基因的表达载体，但其不能在宿主细胞中表达目的基因产物，分析目的基因不能表达的原因是______________。

（5）由于干扰素很难在体外保存，为解决这一问题，可利用______________对干扰素进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→ 设计预期蛋白质的结构→ 推测应有的__________→ 找到对应的脱氧核苷酸序列。

科学家发现细菌细胞中存在清除入侵病毒DNA的功能系统（见下图1），并发明了CRISPR/Cas9基因编辑技术，目前已成为生物科学领域最热门的基因操作技术。下图2 是科研人员运用CRISPR/Cas9基因编辑技术（其中表达载体1的作用是在受体细胞中控制合成CRISPR复合体，表达载体2可以与相应DNA的同源区进行互换、重组），成功地将基因A精确导入到绒山羊细胞内的甲、乙两个基因之间，并和绿色荧光蛋白基因一起表达的过程示意图。请回答。

（1）由图1可知，CRISPR复合体中crRNA的主要功能是__________________________________________，而Cas9蛋白催化断裂的化学键位于_______________________之间。细菌的这种清除能力的生理意义是__________________________________________________。

（2）结合对图1的理解，图2中表达载体1首先要表达出含有________________________序列的crRNA和Cas9蛋白，以结合形成CRISPR复合体。

（3）根据图2，基因表达载体2上需要加入:①基因甲片段、②基因乙片段、③基因A、④绿色荧光蛋白基因等四种DNA片段，这4种片段在载体上的正确排列顺序应是___________（用序号代表相应片段）。在形成重组DNA时需要___________酶参与催化表达载体2与绒山羊DNA的连接。

（4）实验室一般会将重组DNA导入山羊的胚胎干细胞中，以培育、筛选出转基因山羊，选择胚胎干细胞作为受体细胞的主要依据是________________________________________。

（5）与传统的基因工程相比较，运用CRISPR/Cas9基因编辑技术培育转基因生物的明显优点是_________________________________________________________________________________。

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

(1)图中进行的是________(填“体内”或“体外”)基因治疗，该过程利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和________等。

(2)ES细胞是由早期胚胎或________中分离出来的一类细胞，利用其具有________ 性，可以将其培养成人体各种组织器官。

(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的________，该结构除了复制原点外，至少包含____________________和干扰素基因等，为检测干扰素基因是否表达，可以采用____________________的方法。

(4)为了快速获得更多的目的基因常常采用________技术进行扩增。

（1）胚胎干细胞是从动物胚胎发育至_________期的内细胞团或胎儿的_____中分离得到的一类细胞。

（2）图中分化程度最低的干细胞是______。在体外培养条件下，培养液中加入_________因子，可诱导该种干细胞向不同类型的组织细胞分化。

（3) 在机体内，皮肤干细胞分化成皮肤细胞是机体细胞中基因________的结果。

（4）某患者不能产生正常的白细胞，通过骨髓移植可以达到治疗的目的，骨髓的治疗的实质是将上图的______________细胞移植到患者体内。

（5）若要克隆某种哺乳动物，从理论上分析，上述红细胞、白细胞神经细胞中不能选用作为供体的细胞是成熟的___________，其原因是___________。

（6）若某药物可抑制肝肿瘤细胞DNA的复制，使用该药物可使肝肿瘤细胞停留在细胞周期的______________期。

（7）在制备单克隆抗体过程中的细胞融合阶段，用__________细胞与骨髓细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌__________________的杂交瘤细胞。

若小鼠的造血干细胞内Rag₂基因缺失，则不能分化为成熟的淋巴细胞。如图是治愈Rag₂基因缺失引发的免疫功能缺陷症小鼠的流程图。请回答下列问题：

（1）重组细胞必须使用去核的卵母细胞作为受体细胞，说明卵母细胞________________________。

（2）图中②过程所用培养液的成分一般都比较复杂，除了一些____________外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。

（3）图中分离出的ES细胞是囊胚中的____________。除此之外，还可以从____________中提取ES细胞。

（4）图中③过程导入ES细胞的物质是____________。获得该物质用到的工具酶是____________。

（5）经④过程处理以后，为检测Rag₂基因的表达情况，可提取该小鼠骨髓细胞的蛋白质，用____________（物质）进行直接检测，也可利用____________，观察小鼠的发病情况，进行间接检测。

紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的具有独特抗肿瘤作用的物质，目前靠从树皮中提取紫杉醇远远不能满足需求。回答下列问题：

(1)研究人员从红豆杉树皮中分离出具有产紫杉醇能力的内生真菌。将获得的菌丝体分别置于不同pH或温度的培养液中，并加入适量酶X溶液，经过一系列处理后，收集纯化的原生质体，结果如下。图表结果表明，酶X在________条件下活力最佳。

(2)培养基灭菌常采用__________法，灭菌后需要冷却到______________℃左右才能用来倒平板，平板冷却凝固后倒置其原因是_______________________________。

(3)若将收集到的原生质体培养液稀释104倍后，各取_____ mL稀释液分别均匀涂布在3个固体培养基上培养，一段时间后统计菌落数分别为18、19、17。这种接种方法是____________________________，得到的菌落数____________(填“大于”“等于”或“小于”)接种的有活力的原生质体的数量。

(4)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

⑤上述治病方法虽然操作复杂，但效果较为可靠，称为__________________。

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的______________。

（2）ES细胞除来源于早期胚胎外，还可来源于                                            ，它在形态上的特性是____________________________；在功能上的特性是__________________________________________________________。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的___________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有____________的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞中的____________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有基因Rag₂的表达载体。可以根据Rag₂基因的________设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_____，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。