请回答下列与哺乳动物精子和卵子发生有关的问题：

（1）某动物排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于___________卵母细胞阶段，当该细胞发育至 ______________________________期时，才具备受精能力．当_____________________________                                  ，说明受精作用已经完成。

（2）动物的早期胚胎移植到同种且 _______________与供体相同的动物体内，使之继续发育为新个体的技术叫做胚胎移植。为了获得更多的早期胚胎，常用_______________激素对供体进行处理，其目的是获得更多的卵母细胞 ，经人工受精后可得到早期胚胎。

(3) 用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是活细胞膜___________________________________________　。

（4）若要通过胚胎移植获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行____________　处理，再植入到受体内，若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于   冷冻条件下。

近期，中国和韩国的科学家利用某项技术去掉了猪体内的肌肉生长抑制基因，然后把这些“改造过的基因”植入猪的受精卵中，进而发育成肌肉细胞生长不受限制的“肌肉猪”。回答下列问题：

（1）利用体外受精的方法获得猪的受精卵时，采集卵母细胞时，可用__________激素处理母猪，使其排出更多的卵子，然后从________中冲取卵子，与获能的精子在体外受精。

（2）“改造过的基因”需与________等拼接成基因表达载体再导入受精卵中。

（3）将具有“改造过的基因”的受精卵细胞培育成“肌肉猪”需利用_________________等胚胎工程技术。胚胎工程技术最后一道工序在生产实践中的最大意义是__________。

欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的______________细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是_______（A. 受精卵  B. 胚胎干细胞  C. 第一次卵裂形成的细胞  D. 第三次卵裂形成的细胞）

(2)为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进行________处理，将获得的卵母细胞培养成熟，与经__________处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助____________________、__________________等技术才能成为转基因小鼠。

胚胎工程应用前景广阔，请回答：

（1）胚胎工程是指对动物______________所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、______、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。  

（2）合子形成后即在输卵管内进行______________分裂，开始发育。胚胎发育的早期有—段时间是在透明带内进行的，其显著特点是胚胎的总体积____________________________。导致透明袋破裂，胚胎从中伸展出来的过程叫做_____________

（3）防止多个精子与卵子受精的生理机制包括__________        ____     、_________   _____。

请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、__________________、__________________ 以及在母体中发育和产出等过程。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其___________。另外，培养的卵母细胞需要发育至_________________期。

（3）采用激素处理可使奶牛一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是__________________。

（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、__________、________________、________________ 和复制原点等．将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是_____________________，为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是 _____________________ （受精卵、乳腺细胞）。

I．玉米自交系（遗传稳定的育种材料）具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株。获得抗除草剂转基因玉米自交系，技术路线如下图。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A．①③           B．①④        C．②③       D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系_______的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含_____________________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_______________（多选）。

A．无农杆菌附着的未转化愈伤组织

B．无农杆菌附着的转化愈伤组织

C．农杆菌附着的未转化愈伤组织

D．农杆菌附着的转化愈伤组织

（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占_____________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系。

II．胚胎工程是指对动物_______________或____________所进行的多种显微操作和技术处理。此工程是以体内受精过程和早期胚胎发育为理论基础的。哺乳动物精卵细胞发生上最大的区别是卵子在        （时期）完成___________________。受精作用发生时精子首先发生__________，之后当第一个精子接触卵细胞膜时发生_________________________。受精作用的场所是_____________。受精卵形成后，开始进行旺盛的有丝分裂。经历卵裂期、_____________、________________、原肠胚，经组织器官分化，发育成完整的生物个体。其中__________出现最早的分化现象。

自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。

（1）图中过程①②③④是获得孤雌克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程_____（填序号）。

（2）孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺少__________方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，但给研究者提供了很好的材料。

（3）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞________，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（4）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择____________时期的卵母细胞。

（5）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过________方法得到多种cDNA，并通过______________技术扩增产物。

黄连素具有促进排卵和提高受孕率的生殖疗效。作为一种重要的生物碱，黄连素可从中草药黄连、黄柏、三颗针等植物中提取。临床常用来治疗细菌性胃肠炎、痢疾等消化道疾病。请回答下列有关问题。

（1）某生物科研小组利用植物组织培养技术快速大量繁殖含黄连素的黄连等植物。该技术利用的原理是____________________。在培养过程中，离体的黄连茎切段需经过__________、__________，然后培养出根、芽，才能形成完整的黄连小植株。

（2）黄连素具有促进排卵的疗效。卵子在发生过程中，减数第二次分裂是在__________的过程中完成的。获能的精子与卵子相遇时，首先发生 ____________________反应，使顶体内的酶释放出来。卵子完成受精的标志是____________________。 

（3）某生物科研小组想利用基因工程的方法获取催化合成黄连素的酶。基因工程操作过程中的核心步骤是__________；将目的基因导入大肠杆菌细胞内，首先要用__________处理细胞，使之成为感受态细胞。