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            • 1. 2016年日本动物学家培育出转基因“绿光猴”,其培育过程为:将能编码绿色荧光蛋白基因嵌入长尾猴的卵子中,使其受精,所生下的小猴受到紫外线照射时就成了全身发绿的“绿光猴”.请据此问答下列问题:
              (1)如果对已有的荧光蛋白基因进行大量扩增,需要用 ______ 方法,该方法的原理是DNA复制,这项技术需要用到 ______ 酶,该酶需从 ______ 的未端开始催化子链的延伸.
              (2)绿色荧光蛋白基因需要构建成 ______ 之后,用 ______ 方法将其导入到长尾猕猴的卵子中.
              (3)受精卵在体外培育成 ______ 后再利用 ______ 技术将其导入到受体猕猴的子宫中继续发育,检测所出生的猕猴是否为“绿光猴”通常用 ______ 方法.
            • 2. 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长.质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点,如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因),其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞.请据图作答:

              (1)利用PCR技术扩增鱼的抗冻蛋白基因,向反应的试管中添加模板DNA、四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)、 ______ ______
              (2)基因工程的核心是 ______ ,进行这项操作时,为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,在此实例中,应该选用限制酶 ______ 同时对含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割,切割后用 ______  酶处理.
              (3)研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.在培养基中的添加 ______ ,来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,筛选后,为了进一步确定是否含目的基因,用 ______ 方法检测是否有目的基因.通常采用 ______ 技术,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质,在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是 ______
            • 3. 黄曲霉毒素B1 (AFB1)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中,它可以通过食物链进入动物体内并蓄积,引起瘤变.某些微生物能合成AFB1解毒酶.将该酶添加在饲料中可以降解AFB1,清除其毒性.下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图

              请回答:
              (1)基因工程常见的运载工具(体)有 ______ .将目的基因导入酵母细胞,最常用的化学方法是 ______
              (2)酵母细胞导入AFB1解毒酶基因后,采用 ______ 技术,检测到AFB1解毒酶基因存在酵母细胞内.实验发现酵母菌中没有检测到合成的AFB1解毒酶,分析原因可能是 ______
              (3)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是:从提高酶的活性出发,设计预期的蛋白质结构,推测应有的氨基酸序列,找到相对应的 ______
              (4)生态工程需遵循其基本原理,系统整体性原理强调各组分之间要有 ______ ,只有这样地才能顺利完成能量、物质、信息等的转换和流通,并且实现 ______
            • 4. (1)下列有关现代生物技术的有关叙述正确的是 ______
              A.基因工程与蛋白质工程都能制造出新的蛋白质
              B.动物细胞培养时不一定需要添加血清
              C.动物的早期胚胎发育依次经过受精卵、卵裂、桑椹胚、孵化、囊胚、原肠胚等阶段
              D.DNA连接酶和DNA聚合酶都能使核苷酸之间形成磷酸二酯键,属于同一种酶
              (2)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤,其中的核心步骤是 ______ ;PCR技术扩增目的基因是基因工程中常用的技术手段,这一技术的原理是 ______
              (3)植物组织培养的主要原理是植物细胞具有 ______ ,具体过程是在 ______ 和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上,给予适宜的条件,诱导其经过 ______ 产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株.
              (4)克隆动物实际上是用 ______ 方法得到的动物,也就是将一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的 ______ 细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,最终发育为动物个体.
              (5)生态工程是实现循环经济最重要的手段之一,请写出它遵循的基本原理(至少答两项): ______
            • 5. 我国一科研团队将小麦液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因(TaNHX2基因)转移到水稻细胞内,获得了转基因耐盐水稻新品种.回答下列有关问题:
              (1)为保证目的基因在水稻细胞中能够表达,运载体上应含有特定的 ______
              A.复制原点              B.启动子           C.标记基因
              (2)水稻的转化过程为:将水稻幼胚接种到诱导培养基上,经过 ______ 过程,培养出愈伤组织,然后用 ______ 法,将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上,最后诱导愈伤组织形成水稻植株.
              (3)为验证外源基因整合到水稻基因组后是否转录,可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成 ______ ,再以反转录产物为模板,利用TaNHX2基因特异引物,通过 ______ 方法进行基因扩增.若以根细胞为材料扩增结果为阳性(有产物生成),以叶细胞为材料扩增结果为阴性(无产物生成),则说明 ______
              (4)将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的 NaCl溶液中培养,进行耐盐试验,用非转基因幼苗作为对照.培养30天后观察现象,若 ______ 则说明转基因植株获得了耐盐特性.
            • 6. 近年兴起CRISPK-Cas技术被用于预防和治疗多种人类遗传病.该技术的核心是一段具有特定序列的RNA(CRISPR RNA)及与该RNA结合在一起的Cas蛋白构成.回答下列问题:
              (1)治疗人类遗传病最有效的手段是基因治疗,通常又分为 ______ ______ 两种类型.
              (2)用该技术治疗遗传病的基本过程是:根据遗传病致病基因的序列设计一段RNA(即CRISPR RNA),将该RMA与Cas蛋白结合形成复体,并导入患者细胞中,导入方法与外源基因导入人体细胞相似,可采用 ______ 法;进入细胞后的复合体RNA的指引下按照 ______ 原则准确的结合在致病基因部位,而Cas蛋白则对致病基因进行切割.由此可见,Cas蛋白应该是一种 ______ 酶.
              (3)对于患遗传病的个体来说,不可能对每个细胞都注射该复合体,因此,研究人员选用 ______ 为运载体,从而使复合体在运载体的协助下能够大量主动进入人体细胞,但在使用前需要对运载体进行 ______ 处理,以保证其安全性.该运载体进入人体细胞的方式通常是 ______
            • 7. 阅读如下材料,回答相关问题:
              材料甲:科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中,得到了体型巨大的“超级小鼠”.
              材料乙:科学家取免疫后小鼠的B淋巴细胞,并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中,再用一定手段诱导细胞整合,经筛选培养及抗体检测,得到不断分泌特定抗体的杂交瘤细胞.
              材料丙:科学家将HIV的某蛋白作为抗原注入机体后,刺激机体产生可与此蛋白结合的相应分泌蛋白,该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV.
              (1)材料甲属于 ______ 工程的范畴.将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用 ______ 法.
              (2)材料乙属于 ______ 工程的范畴.诱导细胞整合常用的化学试剂是 ______
              (3)用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时,可选提取HIV中的 ______ ,以其作为模板,在 ______ 的作用下合成DNA,从中获取该目的蛋白的基因,构建重组表达载体,随后导入受体细胞.从受体细胞中分享纯化出目的蛋白,该蛋白作为 ______ 注入机体后,刺激机体产生的相应分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV,检测的原理是 ______
              (4)畜牧业生产上常利用胚胎工程相关技术对优良品种的牛羊等进行快速繁殖,以满足生产需求.据此回答下列问题:胚胎移植操作中,对供体和受体母畜通过 ______ 处理,使其生理状况相同;通过冲卵收集到的胚胎一般应处于 ______ 阶段;对收集到的胚胎,利用胚胎分割技术可提高优质胚胎的利用率.
            • 8. 科学家从某细菌中提取抗冻基因,转入番茄并培育出抗冻番茄.如图是转抗冻基因番茄的培育过程,含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点.分析回答问题:
              (1)若要获得抗冻基因,可以从细菌中提取;也可以通过分析抗冻蛋白的 ______ 序列推测基因的结构,进而人工合成抗冻基因.对获得的抗冻基因可用 ______ 技术进行扩增.
              (2)上述两种途径获得的抗冻基因 ______ (填“是”或“否”)一定相同,原因是 ______
              (3)用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒,不能使用SmaI酶切割,原因是 ______ .图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化,应选用 ______ 酶对外源DNA、质粒进行切割.
              (4)图中过程⑤表示 ______
            • 9. 生物学家通过转基因体细胞克隆技术获得转基因牛,以便通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白.请回答下列问题:
              (1)请完善主要步骤:从人的 ______ 获得目的基因;构建含目的基因的表达载体;然后把基因表达载体导入牛的受精卵,目前最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是 ______
              (2)目的基因的检测与鉴定分三个层次.若要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因及目的基因是否转录出了mRNA,检测方法是 ______ ,若要检测目的基因是否翻译成蛋白质,检测方法是 ______
            • 10. 根据现代生物技术知识回答:
              (1)“试管婴儿技术”不仅使一部分不能生育的男女重新获得了生育的机会,也为人类的优生优育开辟了新的途径.在体外受精时,精子首先要进行 ______ 处理;卵母细胞则要培养到 ______ 期才能与精子结合.如果滥用试管婴儿技术设计婴儿性别,将会破坏人类正常的 ______
              (2)用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞,原因是10代以内的细胞一般能保持 ______ ,可以保证供体细胞正常的遗传基础.
              (3)应用修复技术治理镉污染的土壤,可以进行植物修复.常选择种植菊芋等耐镉植物,这体现了生态工程的 ______ 原理.植物中积累的镉会通过 ______ 的富集作用造成危害,所以不能用修复地的植物饲喂动物.
              (4)利用基因工程技术可使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”,如建立生产生长激素的乳腺生物反应器.科学家将生长激素基因和牛乳腺蛋白基因的 ______ 、终止子、标记基因等重组在一起,构建成基因的表达载体,并通过 ______ 方法导入牛的受精卵中.
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