转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点，据图回答下列问题。

（1）若要获得抗病基因，可用_____________限制酶切，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会_________________。切割质粒与获取目的基因用的是___________（相同、不同）的限制酶。切割好的质粒与目的基因需要在_______________酶的作用下形成含抗病基因的重组DNA分子。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有__________________基因作为标记基因。

（3）图中将重组DNA分子导入香蕉受体细胞用到的方法是_____________法。

（4）为了进一步确定目的基因是否翻译成蛋白质，可用的检测方法是________。

（5）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________________的方法，可培育成能表现新性状的植株。图中①到②表示______过程，②到③表示______过程。

（1）各代号表示的育种类型中：①表示________，③表示________。

（2）③⑦过程用到的药剂是________，原理是______________________________。

（3）若⑤过程是杂交，产生的AAA植株，其体细胞含染色体数目是________，该植株所结果实无子的原因是____________________。

（4）⑥过程中用到的工具酶是____________________________。AAA的细胞成功接受抗虫基因B后，经植物组织培养产生幼苗，移栽后长成AAAB的抗虫新品种植株，这种变异属于________。

为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）。

请回答：

（1）获得大量目的基因常用________技术，其原理是_________。

（2）步骤②中，用Ca^2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。

（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_______（填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。

（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与________形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

（5）除了基因工程外，细胞工程和胚胎工程也在人类生活中发挥了巨大作用。例如“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。“试管婴儿”的诞生实际上结合了________、早期胚胎培养、胚胎移植等多种技术手段。再如，通过动物细胞杂交技术制备的单克隆抗体具有__________和灵敏度高等特性，因而广泛应用于疾病的检测、肿瘤的定位等方面。

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV，蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是具有重要经济价值的双子叶植物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。

（1）理论上，基因组文库含有生物的________________基因；而cDNA文库中含有生物的________________基因。

（2）科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程表示____________。

（3）基因工程最核心的步骤是____________，④过程将重组Ti质粒导入烟草体细胞的常用方法____________。

（4）由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是____________基因，它的作用是____________。

（5）过程⑥可采取____________的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过____________的方法来确定植株是否具有抗性。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题。

(1)要使人的生长激素基因在牛的垂体细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括目的基因、_________、__________________、标记基因等部分.在③之前要检测早期胚胎细胞是否已经导入人生长激素基因,宜采用_________________技术.③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段,可以采用______           _____技术,培育出多头相同的转基因牛犊。

(2)prG能激发细胞不断分裂,通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体,Ⅰ最可能是___________细胞,Ⅱ代表的细胞具有____              ________的特点.

(3)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，则与采用叶肉细胞相比较，其优点是_______________________________，⑤过程采用的技术是___________________________。科学家预言，此种“转基因抗虫棉”独立种植若干代以后，将出现不抗虫的植株，此现象来源于_______________。

如图是科学工作者利用苏云金杆菌体内的抗虫基因培育转基因抗虫水稻的培育过程。请据图回答下列问题：

（1）实验中如果用EcoR Ⅰ切割多个外源DNA片段和质粒，则酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有    种，实验中最好选择               切割外源DNA片段和质粒。

（2）图示中属于脱分化阶段的是            （填序号），该过程需要在培养基中添加营养物质和                等成分。

（3）转基因抗虫水稻的目的基因是否完成表达，从分子水平上的检测方法是          ，从个体水平上的检测方法是                             。      

（4）科学家发现该抗虫毒蛋白的杀虫效果不佳，然后通过            或基因合成，对现有抗虫毒蛋白进行改造，这项技术属于               工程。

在生命科学的研究中，基因重组已经不仅是研究的目的，而且日益成为一项重要的研究手段，所以有着不可替代的地位。如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

(1)基因工程中，获取目的基因的主要途径包括直接分离法和______________。

(2)步骤①和②中常用的工具酶是_____________和_____________。

(3)图中质粒上有抗青霉素V钾和抗红霉素两个标记基因，认真观察经过步骤①和②后，有些质粒上的____  _______基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。

(4)为了促进步骤③的进行，一般要用_________________处理大肠杆菌。

(5)步骤④中，将锥形瓶内的大肠杆菌接种到含红霉素的培养基A上培养，目的是筛选含_________________________的大肠杆菌，能在A中生长的大肠杆菌有_______种。

(6)步骤⑤中，用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B(含青霉素V钾和红霉素)和C(含红霉素)两个培养基上，一段时间后，在培养基________(B、C)上会出现含目的基因的菌落。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

科学家利用生物工程技术，探究猪骨形态发生蛋白15(bmP15)基因具有表达特异性和示踪干细胞诱导分化为类卵母细胞的潜能。通过扩增猪bmP15基因的启动子片段与增强型绿色荧光蛋白（EGFP)基因构建表达载体，该工程技术基本流程如下图。请回答下列问题：

（1）利用___________技术扩增bmP15基因的启动子片段的前提是要有一段已知核苷酸序列，以便合成__________。

（2）过程①中，应先用限制酶________________处理表达载体1,以便插入bmP15基因的启动子构建表达载体2。

（3）过程②中，常采用___________技术将表达载体2成功导入受体细胞。

（4）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的___________，以防污染；还需通入一定浓度的C0₂,目的是_________________。

（5）在实验结果的基础上，利用标记的_______基因作探针，与猪羊水干细胞的mRNA进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。

（6）实验说明，bmP15基因启动子调控下EGFP基因在____________细胞表达。

人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图所示。

(1)卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠__________中获取。

(2)图中的高血压相关基因作为___  __,质粒作为________,二者需用__________切割后用DNA连接酶连接成重组载体,该过程与质粒上含有__________有关.

(3)子代大鼠如果________________________________和______________，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。

(4)在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是________、早期胚胎培养和胚胎移植。

下图表示生物实验中通过研磨提取有关物质的操作过程，请回答下列问题。

（1）若图示为“DNA的粗提取与鉴定”的实验操作：

①图中实验材料A可以是下面的            。（填字母）

a．花菜       b．香蕉    c．猪肝    d．猪血

②若选用植物组织，研磨前加入的B一般为洗涤剂和           ，加入洗涤剂的作用是           。

③实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入2mL下表所示的3种溶液中，经搅拌后过滤，获得相应的3种滤液，含DNA最少的是滤液       。

（2）若图示为“检测生物组织中的还原糖”的实验操作：在检测滤液C中是否含有还原糖时，向C中加入的是            色的斐林试剂，欲得到实验结果，还需要进行的步骤是           。

（3）若图示为“叶绿体色素的提取和分离”的实验操作：

①研磨前加入的B应包括无水乙醇、                   ，将研磨液进行过滤时，需要在漏斗基部放上              。

②分离色素时用培养皿盖住小烧杯的目的是                      。