人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体构建重组表达载体需要用到的工具酶有__________。基因表达载体中除了要有目的基因以外，还要有启动子，它是_________识别和结合点部位；除上述外还需有_____________________。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。

（2）为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵，采集的卵子必须发育到________(时期)；采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。生产上常用________期的胚胎进行移植；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。利用______________技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示(①至④代表过程，A至C代表结构或细胞)：

(1)②过程常用________处理农杆菌，使之成为________细胞，利于完成转化过程。

(2)图中③过程叫做________，④过程叫做________，将叶盘培养成草莓幼苗的技术是________，此技术是植物细胞工程的另一项技术：                 的基础。

(3)在分子水平上，可采用______的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原，之前的导入检测方法是：_______________技术。如果目的基因是植物的抗盐碱性基因，则需将植株种植在盐碱地中观察生长状况，这属于 ____________水平的检测。

(4)从题中可以看出这种新型疫苗的化学本质是___________，在免疫学中属于________。

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。

(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA合成_________，然后以此为模板，采用___________________扩增HSA基因。

(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是______________________。

(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是________________________________________________________________________。

(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是___________________________________。

(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与________的生物学功能一致。

屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列________(填“相同”或“不同”）。在提取RNA时需要向提取液中添加RNA酶抑制剂，其目的是_________。

（2）将获得的突变基因导人普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用Sma Ⅰ切割，原因是_________。构建重组质粒时在其目的基因前需要添加特定的启动子，启动子的作用是_______________。

（3）基因表达载体导入组织细胞后，要通过植物组织培养技术培育出青蒿幼苗，该技术的关键步骤是____________。鉴定该基因工程是否成功还要进行___________实验，但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察，其原因是_________。

为了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA，科研人员比较了A方法（通过CTAB裂解细胞，并与蛋白质形成复合物）、B方法（通过SDS裂解细胞释放核DNA，使蛋白质变性）、C方法（通过高盐沉淀蛋白质）从嫩叶、块根中提取总DNA的效果，主要实验步骤和相关检测结果如下，其中氯仿－异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-异戊醇，蛋白质等溶于氯仿-异戊醇。分析回答：

（1）步骤③将DNA粗提液在65℃水浴保温60min的目的是           。步骤④“?”表示            。步骤⑤中加RNA酶的作用是            。

（2）影响DNA纯度的物质主要有          。提取的DNA中RNA残留较多的方法是           。以嫩叶为材料提取DNA的得率较高，原因是         。

（3）电泳可以直观对比DNA的完整性，分子大小不同的DNA在凝胶上迁移速率不同，从而产生不同的条带。下图是上述实验中提取到的总DNA凝胶电泳结果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。实验结果显示A、B方法提取的总DNA电泳结果只有一条带，而C方法有明显的“拖尾”现象。

①只出现一条带的原因是                     。

②出现“拖尾”现象的原因是                    。

R－7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列(3′－UTR)结合，进而影响基因的表达。为研究R－7是否影响家蚕基因B(调控家蚕眼睛发育)的表达，科研人员将基因B中对应3′－UTR的DNA片段与荧光素酶基因(R－7不影响荧光素酶基因的表达)重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果。请回答：

(1)利用PCR技术扩增基因B对应3′－UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核苷酸序 列合成______________________。

(2)利用_____________________________________酶可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体(如图)上的位点_____________，构建重组载体。

(3)将重组载体与R－7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将_____________________、_____________________分别导入两组家蚕胚胎细胞。

(4)科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取________________，经处理检测后获得相对荧光值(在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光)，其结果如图。

(4)依据实验结果可推断，R－7影响基因B的表达，即通过遵循______原则，R－7与基因B所转录的mRNA的3′－uTR结合，进而__________(填"促进"或"抑制")基因B的表达。

回答下列（一）、（二）小题：

(一)转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

（1）若要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会________________________。要获得含抗病基因的重组质粒可用___________和_____限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有_________________基因，作为标记基因。

（3）将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是_______________法。

（4）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________的方法，可培育成能表现新性状的植株，该方法依据的原理是：_______________________________。

(二)图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

科研人员以金定鸭、长乐灰鹅和象洞鸡的全血为实验材料，比较苯酚—氯仿抽提法（方法A）和盐析法（方法B）提取血液中DNA的效率。图中EDTA具有破坏细胞膜、抑制DNA酶的活性的作用，SDS具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性和抑制DNA酶活性的作用。提取过程和结果如下：

提取过程：

实验结果：

注：纯DNA的OD值为1.8，OD值在1.75～1.85间，DNA纯度较好；OD值高于1.8，一般有RNA污染；OD值小于1.8，一般有蛋白质或其他物质污染。

请回答：

（1）本实验不选择哺乳动物血液为实验材料的原因是                 。

（2）步骤①中，若只用蛋白酶K消化处理，对实验结果的影响是                      。

（3）步骤③中，破碎细胞常用的方法是                      。步骤⑤加入蒸馏水的目的是                     。

（4）苯酚和氯仿-异戊醇不溶或微溶于水，密度均大于水，步骤②⑦所依据的原理是                   。

（5）对于长乐灰鹅、象洞鸡来说，较适宜的DNA提取方法分别是                、               。

（6）实验结果表明，不同方法提取的DNA中，影响DNA纯度的主要物质是                。相同体积的不同鸟类的血液DNA提取量有明显差异，其原因可能是                。

下面是高中生物教材中有关实验操作的简图。请据图回答：

（1）若A为苹果，则滤液C常用于检测生物组织中________实验。能否用香蕉替代苹果进行该实验__________。

（2）若A为新鲜的菠菜叶，进行“色素的提取和分离”实验时，溶液B应该是____最终所得滤纸条上的四条色素带很淡，其原因与图示操作有关的是__________。

（3）若A为洋葱，进行“DNA的提取与鉴定”实验时，溶液B应该是_______，在滤液C中加入__________可去除杂质中的蛋白质。

下图是姜堰某中学生物兴趣小组进行的DNA粗提取实验，其中SDS(—种表面活性剂)除了能瓦解细胞膜和核膜，还能与脂质和蛋白质结合。当SDS遇到钾离子时，钾离子可以置换SDS中的钠离子，产生不溶于水的PDS沉淀。请回答下列问题：

（1）实验中，向剪碎的猪肝中加入食盐的主要作用是____。将猪肝匀浆放入65℃水浴锅中水浴l0min以除去部分杂质的主要实验原理是________。

（2）方法一的步骤①中加入洗涤剂的作用是_________。方法三的步骤③中，离心后应取____________。

（3）方法一、二获得的絮状物均带黄色，从DNA在细胞中的存在形式分析，杂质分子最可能是________，可用___________试剂鉴定。

（4）要比较三种方法获得的絮状物中DNA含量，请写出实验思路：______________________________。

（5）哺乳动物的血细胞液不是提取DNA的理想材料，原因是___________________________。