[生物——选修1：生物技术实践]

金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下面是某研究小组测定自来水中金黄色葡萄球菌浓度的实验操作。请回答下列问题：

（1）金黄色葡萄球菌的培养基为7.5％NaCl牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基能为金黄色葡萄球菌的生长提供碳源、氮源及水和无机盐。培养基中加入7.5％NaCl利于金黄色葡萄球菌的筛选，原因是_____________________________________________。

（2）上述培养基的灭菌方法是_____________。在制作血平板时需等平板冷却后，方可加入血液，以防止___________。血平板在使用前，需置于恒温培养箱中一段时间的目的是________________。

（3）取10mL自来水样，加入_____mL无菌水稀释成10^-1稀释自来水样，依次操作，制作10^-2、10^-3、10^-4稀释自来水样。

（4）将0.1 mL 10^-l～10^-4的四个稀释样液，分别接种到4组(每组3个)血平板上的方法是__________。在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现___________。若在10^-3组的3个血平板上，金黄色葡萄球菌菌落数分别为39、38和37，则每升自来水中的活菌数约为____________。  

【生物技术实践】苹果园广泛使用的一种除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，科学工作者按甲图程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，再稀释10³倍．各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为______。

（2）科学工作者为修复被该除草剂污染土壤的目的来选择细菌，所用培养基应该_______

_____________。

（3）接种技术的核心是_________________。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步_______________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是______________，据此可筛选出目的菌。实验结果如乙图显示的A～E五种菌株中，___________是最理想菌株。

[生物——选修1生物技术实践]

   研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物。

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C₁酶、Cx酶和________酶。

（2）如果要对土壤中的纤维素分解菌进行计数，常采用________法进行接种培养，接种工具采用________灭菌的方法。

（3）常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在________时就加入刚果红。________（选答“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生________的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌。为了确定是纤维素分解菌，还需要进行________的实验。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量的测定。

  （1）接种前要对培养基进行____________处理。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在____________条件下进行。

  （2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。如培养纤维素分解菌的菌样应从___________环境中采集。

  （3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制          培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为             。

  （4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是            ，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_____________来筛选纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____________________。

  （5）下图是利用        法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

  （6）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是         。

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B.划线操作须在火焰上进行

C.在5区域中才可以提取到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

 26．2（共15分）下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题。

（7）对于菊花来说，其组织或细胞在      条件下可以发育成完整的植株。在选取菊花茎段时要取       的嫩枝来进行组织培养。对月季来说，适宜花粉培养的时期是花粉应处于        期，为确定该花粉是否处于该时期，最常用的方法是              。

   （8）在培养菊花嫩枝组织和月季花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有             ；在材料消毒时都要先用体积分数为           浸泡，后用质量分数为0.1%的          消毒。

     （9）月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植株产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过       阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于             。

     （10）不同植物对各种条件的要求往往不同，进行菊花组织培养一般将温度控制在   ℃，并且对光照的控制为          。

   【选修Ⅲ  现代生物科技专题】(两道大题，选做选修Ⅰ不做此部分)

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”，

某同学进行了如下实验：

请分析回答下列问题：

(1)配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加如适量的________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是________。

(2)接种微生物的方法有很多，图1中过程③所示的方法为________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是________。用该方法统计样本菌落数后，

所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量(单位：个／ml)，这里的n＝________。

(3)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1：分别取________加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到________℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3：将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

(1)②过程所使用的接种方法是________。用该接种方法对微生物进行计数时，通常选用菌落数在________个的平板进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目________，原因是________。

(2)从用途上来说，1号培养基属于________培养基，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→________→倒平板。

(3)该实验中酶活性鉴定是鉴定________酶的活性，可以加入________指示剂，如果指示剂变为________色，说明该酶的检测为阳性。